蜂蜜中四環(huán)素類抗生素的殘留檢測方法及降解規(guī)律研究.pdf

1、在養(yǎng)蜂生產(chǎn)過程中，四環(huán)素類抗生素（TCs）通常被用來治療或預防蜜蜂美洲幼蟲腐臭病或歐洲幼蟲腐臭病，但同時也造成了蜂產(chǎn)品中TCs殘留。在蜂蜜的加工儲存過程中，在合適的溫度、酸度、水環(huán)境下，TCs會發(fā)生較大程度的差向異構(gòu)化，生成差向異構(gòu)體(ETCs)，ETCs 毒性甚至比藥物原形更強。因此，有必要對蜂產(chǎn)品中TCs及其降解產(chǎn)物ETCs的進行監(jiān)測，防止TCs對人體可能造成的傷害。
　　 盡管已經(jīng)有許多測定TCs的方法，但這些方法都是針對

2、母體的殘留分析。本研究采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立了同時測定蜂蜜樣品中4種TCs和3種ETCs的方法，即四環(huán)素（TC）、強力霉素（DC）、土霉素（OTC）、金霉素（CTC），差向四環(huán)素（ETC）、差向土霉素（EOTC）、差向金霉素（ECTC）。蜂蜜樣品中殘留的藥物用EDTA-McIlvaine緩沖液提取，提取液依次經(jīng)OASIS HLB及羧酸弱陽離子柱固相萃取柱富集、凈化、洗脫。洗脫液微孔濾膜過濾后，通過流動相甲酸水+乙腈梯度分離，電

3、噴霧-串聯(lián)質(zhì)譜進行測定。在多反應監(jiān)測模式下，22min內(nèi)7種藥物（TC、OTC、CTC、DC、ETC、ECTC、EOTC）全部分離并進行定性定量。樣品在50μg/kg-200μg/kg添加范圍內(nèi)，回收率在64.9％-91.0％之間，相對標準偏差(RSD)不大于9.7％。OTC、EOTC、TC及ETC的檢測限為1μg/kg，CTC及ECTC、DC的檢測限為2μg/kg。本方法靈敏、可靠，可用于蜂蜜中七種藥物殘留的同時檢測（TC、OTC、C

4、TC、DC、ETC、ECTC、EOTC）。
　　 為了探求蜂蜜貯存和加工過程中其殘留TCs的代謝規(guī)律，采用上述已建立的方法，考察蜂蜜中影響TCs水解代謝規(guī)律的主要因素，模擬蜂蜜的不同的加工存儲條件獲得不同殘留量樣本，批量分析后，經(jīng)統(tǒng)計建立降解模型。得出以下結(jié)果：
　　 （1）TCs及ETCs均不穩(wěn)定，光照條件下易降解。而避光保存時，蜂蜜中殘留TCs的主要降解途徑為水解，水解產(chǎn)物為ETCs，其主要影響因素為環(huán)境溫度(加工、

5、儲存)，時間（加工、儲存），初始濃度。蜂蜜品種、包裝密封性影響不明顯。
　　 （2）依據(jù)因子設計法獲得不同加工條件下的TCs殘留數(shù)據(jù)，建立完全二次水解動力學模型。
　　 （3）依據(jù)回歸正交組合設計法獲得不同存儲條件下的TCs殘留數(shù)據(jù)，建立完全二次水解動力學模型。
　　 通過研究TCs殘留蜂蜜在加工、貯存過程中的降解規(guī)律，闡明了加工存儲溫度、時間、初始濃度與TCs及ETCs殘留關(guān)系，對蜂蜜的生產(chǎn)加工管理，養(yǎng)蜂生產(chǎn)中