發(fā)根農(nóng)桿菌介導的棉花遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、棉花是我國重要的經(jīng)濟作物,但由于我國可耕地面積和水資源十分有限以及病蟲害嚴重導致棉花生產(chǎn)安全壓力很大。隨著生物技術(shù)的迅猛發(fā)展,利用基因工程的手段將外源有益基因轉(zhuǎn)入棉花的研究也越來越熱。目前,轉(zhuǎn)基因常用的方法是以根癌農(nóng)桿菌介導棉花遺傳轉(zhuǎn)化,但該方法受到棉花基因型的限制、轉(zhuǎn)化效率低和轉(zhuǎn)化周期長等不利因素的影響從而制約了棉花轉(zhuǎn)基因的發(fā)展和運用。
　　 本論文創(chuàng)新性地采用發(fā)根農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化棉花,通過毛狀根的誘導和培養(yǎng),獲得了再生植株,并

2、獲得轉(zhuǎn)有三個MYB轉(zhuǎn)錄因子基因的棉花毛狀根。
　　 (1)利用子葉穿孔的方法,建立了無菌條件下獲得棉花毛狀根的體系。獲得的棉花毛狀根在無激素的培養(yǎng)基上表現(xiàn)出自發(fā)性生長和部分失去向地性等典型的毛狀根性狀。
　　 (2)利用三種不同的發(fā)根農(nóng)桿菌A4、K599和ATCC15834分別侵染誘導三種陸地棉品種石遠321、YZ-1和柯字312,討論了菌種和品種對棉花毛狀根誘導的影響。經(jīng)ro／AB基因的PCR檢測篩選陽性棉花毛狀根,發(fā)

3、現(xiàn)由野生型A4發(fā)根農(nóng)桿菌介導柯字312棉花品種轉(zhuǎn)化的毛狀根得率最高。
　　 (3)討論了棉花毛狀根誘導的最佳外植體部位和苗齡。實驗結(jié)果表明10-15天苗齡的棉花子葉最適合誘導毛狀根。
　　 (4)討論了誘導棉花毛狀根的固體培養(yǎng)基在碳源、無機鹽和有機成分上的最優(yōu)組合。研究表明,以葡萄糖30g／L為碳源的MS培養(yǎng)基最優(yōu)。
　　 (5)初步建立了棉花毛狀根再生植株的培養(yǎng)體系,獲得了3株再生植株。
　　 (6)將