石栗accB與accC基因全長cDNA克隆及表達分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、石栗(Aleurites moluccana)是大戟科(Euphorbiaceae)的木本油料植物,其種子油脂含量很高,是一種很重要的生物質(zhì)能源植物。本試驗克隆獲得石栗ACCase中BCCP(生物素羧化酶載體蛋白,biotin carboxylase carrier protein)亞基以及BC(biotin carboxylase,生物素羧化酶)亞基的編碼基因accB與accC的全長cDNA序列,對其進行生物信息學分析,并通過半定量R

2、T-PCR分析這兩個基因在石栗種子不同生長時期中的表達變化,為今后篩選分子標記或研究油脂合成相關酶基因提供參考。
  1.通過同源克隆法和RACE技術(shù)相結(jié)合,克隆得到了accB、accC這兩個基因的全長cDNA序列,并推導出編碼區(qū)氨基酸序列。通過NCBI網(wǎng)站及相關軟件進行分析比對。結(jié)果顯示,accB基因全長cDNA序列大小為1170bp,編碼區(qū)長度為798bp,編碼265個氨基酸。accB基因核苷酸序列與基因庫中已注冊的油桐、麻風

3、樹的核苷酸酸序列的同源性依次為:93%和82%,其氨基酸序列與陸地棉、油梨、大豆、苜蓿、麻風樹、油桐的BCCP亞基的氨基酸序列同源性分別為:91%、83%、68%、64%、61%、52%;accC基因全長cDNA序列大小長度為1607bp,編碼區(qū)長度為1119bp,編碼372個氨基酸,accC基因核苷酸序列與油桐、麻風樹和蓖麻的核苷酸酸序列的同源性分別為:97%、93%和91%,其氨基酸序列與麻風樹、陸地棉、煙草、花生、大豆、擬南芥的B

4、C亞基的氨基酸序列同源性分別為:96%、91%、89%、89%、88%、83%。
  2.采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將種子總RNA反轉(zhuǎn)錄后,獲取了高質(zhì)量的cDNA。以cDNA為模板,石栗管家基因Actin作為內(nèi)參,通過半定量RT-PCR分析了石栗accB、accC這兩個基因在石栗種子內(nèi)不同發(fā)育時期的表達水平變化。在種子發(fā)育過程中accB基因與accC基因表達量大致情況是:六月份>七月份>五月份,同時油脂含量從五月份至七月份三個月間是持續(xù)上升

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