白藜蘆醇對(duì)培養(yǎng)的人黑素細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：研究RES對(duì)ET-1介導(dǎo)的黑素細(xì)胞黑素合成的影響及其相關(guān)機(jī)制，并探討其對(duì)黑素細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用，為RES作為一種新型、安全和高效的皮膚美白祛斑物質(zhì)提供一定的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：①建立不含佛波醇酯（TPA）和霍亂毒素（CT）體外培養(yǎng)正常人黑素細(xì)胞的方法：以避免TPA和CT改變黑素細(xì)胞的生物學(xué)特性，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供可靠的黑素細(xì)胞來源。②研究ET-1對(duì)培養(yǎng)的人黑素細(xì)胞生物學(xué)特性的影響：探討ET-1 對(duì)體外培養(yǎng)的正常

2、人黑素細(xì)胞形態(tài)、增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成的影響，并尋找一個(gè)最有效的調(diào)控濃度，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。③RES對(duì)人黑素細(xì)胞的細(xì)胞毒性分析：以探討RES 應(yīng)用于美白祛斑治療的安全性，并尋找出其安全濃度范圍，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。④ 探討RES對(duì)ET-1 介導(dǎo)的黑素合成的影響及其相關(guān)機(jī)制：以探討RES 應(yīng)用于美白祛斑治療的有效性，并研究其相關(guān)機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 結(jié)果：⑴在第一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究中，我們?nèi)×饲嗌倌臧?/p>

3、皮環(huán)切術(shù)后包皮組織6 例，年齡6-11 歲，平均8 歲，用不含TPA 和CT 的角質(zhì)形成細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（KC-SFM）培養(yǎng)、用差速貼壁法及胰酶差速消化法去除角質(zhì)形成細(xì)胞、用兩段法去除成纖維細(xì)胞，所培養(yǎng)出的細(xì)胞經(jīng)多巴染色和抗S-100、抗HMB45 蛋白抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色均呈陽(yáng)性反應(yīng)，證實(shí)為黑素細(xì)胞，從而建立了不含TPA 和CT 體外培養(yǎng)正常人黑素細(xì)胞的方法，該方法穩(wěn)定、可靠。⑵在第二項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究中，我們?nèi)×饲嗌倌臧きh(huán)切術(shù)后包皮組織6

4、 例，年齡6-15歲，平均11歲，分別用倒置顯微鏡觀察、CCK-8 法、多巴氧化法和NaOH 法測(cè)定了ET-1對(duì)黑素細(xì)胞形態(tài)、增殖、酪氨酸酶活性和黑素含量的影響。該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：一定濃度的ET-1 可有效地促進(jìn)培養(yǎng)的正常人黑素細(xì)胞的增殖和樹突形成，上調(diào)酪氨酸酶活性和增加黑素含量，10nM 的ET-1不僅能促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖及酪氨酸酶活性，而且此濃度下的黑素含量水平最高，因此10nM是最有效的調(diào)控濃度。⑶在分析RES對(duì)人黑素細(xì)胞的細(xì)胞毒性

5、作用時(shí)，取青少年包皮環(huán)切術(shù)后包皮組織3例，年齡6-12歲，平均10歲，用CCK-8法測(cè)定黑素細(xì)胞的增殖抑制率，Annexin V/PI雙染色法流式細(xì)胞儀檢測(cè)黑素細(xì)胞的凋亡率。該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，10μM 濃度以下的RES 對(duì)人黑素細(xì)胞無增殖抑制作用也無凋亡促進(jìn)作用。⑷在研究RES對(duì)ET-1介導(dǎo)的黑素合成的影響及其相關(guān)機(jī)制中，取青少年包皮環(huán)切術(shù)后包皮組織9 例，年齡6-15歲，平均12歲，采用NaOH法測(cè)定黑素含量，多巴氧化法測(cè)定黑素細(xì)胞的

6、酪氨酸酶活性，半定量RT-PCR法測(cè)定酪氨酸酶mRNA和TRP-1 mRNA表達(dá)水平。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：0.1~10μM的RES 可抑制ET-1 介導(dǎo)的黑素合成，其主要機(jī)制可能是通過抑制酪氨酸酶活性起作用，而與酪氨酸酶mRNA 和TRP-1mRNA 的表達(dá)無關(guān)。
　　 結(jié)論：RES可作為一種內(nèi)皮素拮抗劑，可以通過抑制酪氨酸酶活性減少黑素合成，且在10μM濃度以下時(shí)無細(xì)胞毒性作用。因此，RES可作為一種皮膚美白物質(zhì)，其安全、有效