Pokemon在肝癌細胞HepG2中對CyclinA的調控作用.pdf

1、目的：明確肝癌細胞中Pokemon對CyclinA的調控作用，為二者的后續(xù)研究奠定基礎。
　　方法：構建兩段不同長度的CyclinA熒光素酶報告基因質粒載體：pLuc-300、pLuc-600，均分別與 Pokemon表達質粒和pcDNA3.1(-)轉染入體外培養(yǎng)的肝癌細胞HepG2中，培養(yǎng)48小時后采用雙熒光素酶報告基因檢測法檢測CyclinA啟動子的轉錄活性；將Pokemon siRNA和Scramber siRNA分別轉染入

2、肝癌細胞 HepG2中，培養(yǎng)0、24、48、72小時后提取細胞總蛋白，采用Western Blot法檢測Pokemon和CyclinA的蛋白表達。
　　結果：雙熒光素酶報告基因檢測法顯示構建的pLuc-300、pLuc-600均有轉錄活性，其中pLuc-300轉錄活性較pLuc-600強，Pokemon對二者的轉錄活性均有抑制。Western Blot法發(fā)現隨著轉染Pokemon siRNA時間的增加，Pokemon蛋白表達逐漸減