不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基對原代乳鼠心肌細胞影響的研究.pdf

1、乳鼠心肌細胞人工體外培養(yǎng)技術由Harary在1960年創(chuàng)立，經(jīng)過半個多世紀的發(fā)展，現(xiàn)已成為心血管研究領域一門十分重要的成熟的基礎技術，廣泛應用于心肌生理、心肌肥大、心肌缺血/再灌注損傷、心肌再生等研究。葡萄糖作為乳鼠心肌細胞培養(yǎng)基的主要成分之一，對心肌細胞的生長、增殖和功能狀態(tài)維持等都具有重大影響。內質網(wǎng)是細胞內負責蛋白質合成、轉運、修飾和正確折疊等生理功能的細胞器，對細胞和機體至關重要。然而，當內質網(wǎng)受某些因素影響導致未折疊或錯誤折疊

2、蛋白蓄積時，將引起內質網(wǎng)應激(endoplasmicreticulumstress，ERS)。研究發(fā)現(xiàn)，ERS參與了許多疾病的發(fā)生，如肥胖、糖尿病、腫瘤和心肌肥大、心肌缺血/再灌注損傷等，還可能與糖尿病心肌病有關。葡萄糖調節(jié)蛋白78(glucoseregulatedprotein78，GRP78)是應激誘導的內質網(wǎng)預留蛋白，是維持內質網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的重要調節(jié)劑，也是內質網(wǎng)應激的經(jīng)典標志物。本實驗通過觀測細胞形態(tài)學及活性的改變、GRP78在蛋白及

3、基因水平表達量的變化，并以衣霉素處理組作為陽性對照，探討不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基對原代乳鼠心肌細胞的影響關系。
　　目的:通過觀察原代乳鼠心肌細胞在不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基作用下細胞形態(tài)學、活性以及內質網(wǎng)應激的情況，以探討葡萄糖對原代乳鼠心肌細胞的影響關系。
　　方法:使用不同葡萄糖濃度的培養(yǎng)基（葡萄糖濃度分別為5.6mmol/L（低糖）、11.1mmol/L（中糖）、25mmol/L（高糖））原代培養(yǎng)乳鼠心肌細胞;以加入1mg/L

4、或5mg/L衣霉素孵育心肌細胞6h、12h或24h作為陽性對照。然后對各實驗分組在高倍倒置相差顯微鏡下觀察心肌細胞形態(tài)及搏動狀況，CCK-8法檢測細胞活性，HE染色后觀察細胞形態(tài)變化，并用Westernblot法、RT-PCR法檢測GRP78的表達水平。
　　結果:高糖培養(yǎng)基及中糖培養(yǎng)基組乳鼠心肌細胞明顯較低糖培養(yǎng)基組生長更旺盛、增殖數(shù)量更多、伸出偽足更多、形態(tài)學評分更高、搏動頻率更高、細胞活性更好(p＜0.01)，高糖培養(yǎng)基組與