基因工程乙肝表面抗原的表達、純化及應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、乙型肝炎(HepatitisB，HB)是由乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)引起的世界范圍的傳染性疾病，其囊膜蛋白乙肝表面抗原(HepatitisBsurfaceantigen，HBsAg)能夠誘導機體產生保護性抗體乙肝表面抗體(HepatitisBsurfaceantibody,HBsAb)，是乙肝疫苗的主要成分。同時，HBsAg也是ELISA診斷免疫是否成功的主要試劑成分。大量制備HBsAg在預防和檢測方面有重要

2、意義。本實驗開展了HBsAg的體外表達及表達后初步純化、應用的研究工作。 從已確診的乙肝病人血清中提取DNA，利用Primer5.0，參照GeneBank發(fā)表的序列，設計針對編碼HBsAgS基因的特異性引物。PCR擴增S基因，將其分別克隆入畢赤酵母胞內表達載體pPICZB和分泌型表達載體pPICZaA中，成功構建了重組質粒pPICZS和pPICZaS。構建的重組子經SacI線性化后，電轉化入酵母菌株GS115。利用抗生素Zeoc

3、in篩選重組子，誘導表達后，進行Western-blot，ELISA鑒定。結果表明，HBsAg在畢赤酵母中得到胞內表達，未得到分泌表達。經增加抗生素Zeocin的濃度篩選出高表達的工程菌GS115-pPICZS。擴大培養(yǎng)后，進一步研究表明，96h為最佳收獲時間，表達量達0.31g/L(40g菌體沉淀濕重)。經鎳柱親和層析純化，得到較純的HBsAg，其免疫原性與反應原性良好，能夠成為工業(yè)化生產的優(yōu)良菌株。 同時，為了提高HBsAg

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