流式細胞儀三色法檢測外周血Th亞群方法的建立及圍手術期同種輸血對食管癌患者Th亞群的影響.pdf

1、安徽醫(yī)科大學碩士學位論文流式細胞儀三色法檢測外周血Th亞群方法的建立及圍手術期同種輸血對食管癌患者Th亞群的影響姓名：葉衛(wèi)東申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：劉華平張循善20050501安徽醫(yī)科大學碩士學位論文流式細胞儀三色法檢測外周血Th亞群方法的建立及圍手術期同種輸血對食管癌患者Th亞群的影響摘要目的研究佛波酯(Phorbol12一myristate13一Acetate，PMA)對T輔助細胞(Th)表面CD4分子表達的

2、影響，建立流式細胞儀三色法檢測外周血Th細胞亞群的方法及合適的質量控制方案；檢測食管鱗癌患者Th細胞亞群的變化和圍手術期接受同種輸血對食管鱗癌患者手術后Th細胞亞群的影響。方法用熒光標記的抗CD3／4／8抗體同經(jīng)不同濃度的P姒和l蟾／mL的Ionomycin刺激培養(yǎng)2、3、4h的正常人外周血中的T細胞表面上相應的抗原分子相結合，溶血后用流式細胞儀檢測CD4通道(Th細胞)的熒光強度；外周血用RPMll640培養(yǎng)液和終濃度為25ng／ml

3、的PMA、l地g／ml的Ionomycin、20ng／ml的Monensin培養(yǎng)2h并固定和破膜后，加入熒光標記的CD4、IFN—Y和IL～4抗體同含相應抗原的細胞相結合，用流式細胞儀檢測ThO、Thl和Th2細胞；用CD69作為淋巴細胞激活的指標，MPO作為評價通透劑作用效果的指標，建立Th細胞亞群檢測的質量控制方法；利用上述方法測定健康對照組、食管鱗癌患者組、圍手術期接受同種輸血的食管鱗癌患者組和圍手術期未接受同種輸血的食管鱗癌患者

4、組的術前和術后5天外周血Th細胞亞群。結果培養(yǎng)后CD4通道的平均熒光強度(MFI)隨PMA質量濃度的升高和刺激時間的延長而降低，25ng／ml的P凇刺激培養(yǎng)2h，CD4細胞與CD4一細胞能明顯區(qū)分，CD3細胞900／oDA上都表達CD69，通透劑作用后90％DA上的粒細胞MPO；優(yōu)化出終濃度為25ng／ml的PMA、lgg／ml的Ionomycin、20ng／mi的Monensin培養(yǎng)2h的培養(yǎng)方案，成功建立流式細胞儀CD4、IFN—Y