HCMV潛伏感染的老年小鼠AD樣神經病理學模型的建立.pdf

1、目的:建立人巨細胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)潛伏感染的老年小鼠AD樣神經病理學模型,觀察HCMV潛伏感染引起小鼠大腦皮質神經病理的改變,以期為AD(Alzheimer's disease,AD)的病因學研究及發(fā)生機制提供新的思路和合適的動物模型.方法:將24只8周齡SPF級BALB/c小鼠按雌、雄l:1配成12對,并隨機分成病毒感染組和DMEM對照組,每組6對.病毒感染組每只小鼠腹腔注射HCMV懸液1×

2、105PFU/ml 1.0 ml;DMEM對照組小鼠每只腹腔注射DMEM液1.0 ml.以上兩組在屏蔽系統(tǒng)中繼續(xù)飼養(yǎng)十四個月后,將一半小鼠引頸處死,取大腦組織進行如下實驗以確定HCMV的潛伏感染:(1)勻漿進行病毒分離及體外激活實驗;(2)PCR、RT-PCR分別檢測HCMV UL83 DNA、IE DNA和相應的mRNA;(3)石蠟包埋切片用于原位雜交和免疫熒光,分別檢測HCMV UL83 DNA、IE DNA和HCMV pp65抗原

3、的表達;(4)戊二醛固定,超薄切片用透射電鏡觀察大腦皮層神經元超微結構變化和皰疹樣病毒顆粒.在確定的HCMV潛伏感染小鼠腦組織的基礎上,通過如下實驗觀察HCMV潛伏感染引起小鼠大腦皮質的AD樣的病理改變:(1)HE染色觀察大腦皮質神經病理學改變;(2)剛果紅染色觀察淀粉樣斑塊;(3)浸銀染色觀察神經元纖維纏結并計數單位面積中神經元和神經元纖維纏結的數目;(4)免疫熒光檢測Tau蛋白的表達;(5)透射電鏡照片計數突觸數密度.同時對剩下的另

4、一半小鼠進行免疫抑制干預,誘導HCMV的體內再激活,以進一步確定HCMV的潛伏感染.按150mg/kg的劑量給各組小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺,每隔六天注射一次,如此共注射三次,在最后一次注射后的第六天處死所有小鼠,取小鼠大腦皮質戊二醛固定,透射電鏡觀察皰疹樣病毒顆粒.結論:1.首次建立HCMV潛伏感染老齡小鼠模型,為闡明HCMV在腦組織的潛伏感染機制奠定了重要基礎.2.首次發(fā)現(xiàn)HCMV感染老齡小鼠大腦皮質神經元內呈較規(guī)則折疊的絲狀包涵體,為研