缺氧誘導(dǎo)因子1在嚴重?zé)齻缙诟闻K葡萄糖轉(zhuǎn)運體1變化中作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:觀察嚴重?zé)齻笫蟾闻K葡萄糖轉(zhuǎn)運體Glut-1蛋白的表達及其變化,探討HIF-1在Glut-1mRNA轉(zhuǎn)錄變化中的作用.材料與方法:采用30﹪體表面積燒傷Wistar大鼠模型,Western Blotting法檢測大鼠肝臟Glut-1蛋白的表達及其變化.以含有Glut-1全長調(diào)控序列的表達載體(構(gòu)建體A)為模板,PCR擴增其中與缺氧反應(yīng)相關(guān)的序列,并將PCR產(chǎn)物亞克隆到無啟動子的載體pGL3-Promoter中,即為構(gòu)建體N;兩步P

2、CR法構(gòu)建突變型的HRE(即構(gòu)建體M).將構(gòu)建體A、構(gòu)建體N、構(gòu)建體M轉(zhuǎn)染正常大鼠肝細胞株BRL,或?qū)?gòu)建體N、構(gòu)建體M分別與含有HIF-1cDNA質(zhì)粒的表達載體p(HA)HIF-1共轉(zhuǎn)染,24小時后,細胞置于1﹪O<,2>濃度下誘導(dǎo)表達12小時,或在缺氧處理以前加入SB203580或U0126處理細胞1小時,再將細胞置于1﹪O<,2>濃度下誘導(dǎo)表達,分析報告基因的表達及其變化.結(jié)論:①嚴重?zé)齻院?大鼠肝臟的Glut-1蛋白含量增加.

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