氧化應(yīng)激對大鼠髓核細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：以原代培養(yǎng)的大鼠髓核細(xì)胞為靶細(xì)胞，研究過氧化氫( H2O2)對大鼠髓核細(xì)胞生長的抑制及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，并探討絲裂素活化蛋白激酶( MAPK)信號傳導(dǎo)途徑在H2O2氧化應(yīng)激誘導(dǎo)該細(xì)胞凋亡過程中的作用。 方法：通過酶消化法原代培養(yǎng)大鼠髓核細(xì)胞，選擇對數(shù)生長期髓核細(xì)胞，分別加入0、50、100、200、400、800μ mol/L不同濃度的H2O2處理24h。根據(jù)MTT檢測確定H2O2的最佳作用濃度。然后將髓核細(xì)胞隨即分為5

2、組：H2O2組、p38MAPK特異性阻斷劑(SB203580)+H2O2組、JNK特異性阻斷劑(SP600125)+H2O2組、SB203580+SP600125+H2O2組及對照組。用免疫組織化學(xué)檢測P-p38MAPK(Phospho-mitogenactivated protein kinase)和P-JNK(Phospho-c-Jun NH2-teminal Kinase)的表達(dá)。用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(t

3、erminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP nick end labeling，TUNEL)檢測細(xì)胞調(diào)亡。Westem印跡法檢測SAPK/JNK、p38MAPK及其磷酸化組分的表達(dá)。利用RT-PCR檢測髓核Ⅱ型膠原的表達(dá)。 結(jié)果：H2O2處理髓核細(xì)胞后，TUNEL檢測顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡明顯。H2O2能夠激活髓核細(xì)胞內(nèi)p38MAPK和JNK的活性；SB203580能夠有效的抑