全真一氣湯復(fù)方多糖對(duì)免疫抑制小鼠免疫功能影響初探.pdf

1、目的:
　　1、研究探討全真一氣湯多糖的提取純化工藝；
　　2、利用環(huán)磷酰胺（CY）復(fù)制免疫抑制小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑥亩鵀檠芯咳嬉粴鉁嗵堑拿庖哒{(diào)節(jié)作用及其機(jī)理創(chuàng)造條件；
　　3、通過(guò)觀察免疫抑制小鼠整體免疫功能變化及腸道黏膜免疫，探討全真一氣湯復(fù)方多糖提高免疫抑制小鼠機(jī)體免疫功能的可能機(jī)制，進(jìn)一步闡明全真一氣湯復(fù)方多糖提高免疫功能的作用靶點(diǎn)，為該方的臨床合理應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為中藥復(fù)方多糖治療虛損性疾病提供思路及方法。<

2、br>　　方法:
　　1、以多糖含量為指標(biāo)，考察脫蛋白、除色素對(duì)純化工藝的影響，并比較超濾法和透析法的優(yōu)劣；
　　2、健康SPF級(jí)BALB/C雄性小鼠20只，隨機(jī)分為2組①模型組（n=10）：腹腔注射環(huán)磷酰胺（CY），劑量為100mg/kg，復(fù)制腸道免疫抑制模型；②正常對(duì)照組（n=10）：同樣方法注射等量生理鹽水。注射后觀察對(duì)比2組小鼠的飲食、活動(dòng)、體貌等變化，24H后摘眼球取血處死動(dòng)物，兩組分別摘取小鼠的胸腺和脾臟，稱(chēng)重（

3、mg），分別除以小鼠體重(g)，得到胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。B.小心取出全小腸,肉眼計(jì)數(shù)小腸Peyer’s結(jié)的數(shù)量,觀察其形態(tài),從數(shù)目和形態(tài)兩方面對(duì)Peyer’s結(jié)進(jìn)行計(jì)分。C.全自動(dòng)血球分析儀檢測(cè)小鼠外周血白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)目。根據(jù)上述數(shù)據(jù)對(duì)建立的腸道免疫抑制模型進(jìn)行評(píng)價(jià)；
　　3、實(shí)驗(yàn)造模成功后，另取健康SPF級(jí)BALB/C雄性小鼠28只，隨機(jī)分為4組：①正常對(duì)照組(Z)②模型組(M)③QZYQPS灌胃組(GW)④QZYQPS腹腔

4、注射組(ZS)。GW組每天灌胃給予QZYQPS混懸液，劑量為0.75g.kg-1.d-1；ZS組每天腹腔注射QZYQPS（0.25g.kg-1.d-1)。Z、M、ZS組每天灌胃給予灌胃組同體積生理鹽水，Z、M、GW組每天注射給予注射組同體積的生理鹽水，共10天；
　　4、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為三部分，第一部分：探討全真一氣湯多糖對(duì)免疫抑制小鼠腸道整體免疫功能的影響（包括檢測(cè)小鼠臟器指數(shù)、派氏結(jié)計(jì)分、外周血白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清IL-2濃

5、度、溶血素含量、耳腫脹率）；第二部分：采用免疫組化的方法檢測(cè)胸腺、脾臟、小腸絨毛凋亡基因Bcl-2、Bax的含量；第三部分：采用ELASA法測(cè)定腸道SIgA的含量。
　　結(jié)果:
　　1、經(jīng)過(guò)透析法精制后多糖含量高于超濾法；經(jīng)脫蛋白工藝處理后，多糖含量略有下降，但脫蛋白后再經(jīng)過(guò)透析法精制，多糖含量有大幅度提升；除色素工藝對(duì)多糖含量的影響較小，但除色素后再經(jīng)過(guò)透析法精制，可以得到高純度的多糖，含量達(dá)87.63±0.97％；

6、>　　2、腹腔注射CY及生理鹽水后小鼠無(wú)一例死亡，正常組小鼠一般情況良好，毛色光亮，對(duì)外界刺激反應(yīng)靈敏；模型組小鼠精神萎靡，毛色枯槁，活動(dòng)和進(jìn)食較正常組減少。經(jīng)CY腹腔注射24小時(shí)后的小鼠臟器指數(shù)降低，Peyer’s結(jié)計(jì)分較正常組比較減少，外周血白細(xì)胞數(shù)目及淋巴細(xì)胞數(shù)目均明顯降低。對(duì)比正常組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；
　　3、GW組、ZS組的臟器指數(shù)、派氏結(jié)計(jì)分、外周血白細(xì)胞數(shù)目及淋巴細(xì)胞數(shù)目均較M組高（P＜0.05）；GW組

7、、ZS組的血清溶血素含量及IL-2濃度較M組高（P＜0.05）；GW組、ZS組的耳腫脹率較模型組高（P＜0.05），且GW組有優(yōu)于ZS組的優(yōu)勢(shì)；
　　4、GW組、ZS組胸腺、脾臟、小腸絨毛與M組比較抑制凋亡基因Bcl-2含量升高、促凋亡基因Bax的含量減低（P＜0.05）；GW組、ZS組的腸道SIgA的含量較模型組增加（P＜0.05）；且GW組均優(yōu)于ZS組。
　　結(jié)論：
　　1、脫蛋白、除色素工藝對(duì)于全真一氣湯復(fù)方多糖

8、精制過(guò)程有較大的影響，優(yōu)化后的最終工藝為：水提→醇沉→酶法脫蛋白→大孔樹(shù)脂除色素→透析；
　　2、腹腔注射劑量為100mg/kg環(huán)磷酰胺（CY）24小時(shí)可以成功構(gòu)建小鼠免疫抑制模型；
　　3、全真一氣湯復(fù)方多糖可對(duì)抗免疫抑制小鼠免疫器官重量、外周血白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)目的降低，刺激外周血血清IL-2的增加，對(duì)體液和細(xì)胞免疫功能具有促進(jìn)作用，同時(shí)也提示多糖口服給藥免疫活性強(qiáng)于腹腔注射給藥；
　　4、QZYQPS口服及注射有