鯽魚肝微粒體細胞色素P450酶系的初步研究.pdf

1、細胞色素P450是一組含鐵血紅素同功酶超家族，參與眾多臨床藥物的代謝。P450的知識是藥物開發(fā)和臨床使用的基本知識，美國FDA要求新藥申報時提供有關(guān)對P450影響的資料(包括參與代謝的P450酶和對P450亞型的誘導(dǎo)、抑制作用等)。目前有關(guān)食品動物CYP450酶系報道很少，尚未見有關(guān)于鯽魚肝臟藥物代謝酶的研究報道。本課題對鯽魚肝微粒體細胞色素P450酶系進行了初步研究，以期為魚類P450的進一步深入研究和指導(dǎo)水產(chǎn)藥物的臨床合理應(yīng)用提供理

2、論基礎(chǔ)。 1 鯽魚肝微粒體細胞色素P450酶系檢測方法學研究 為建立鯽魚肝微粒體細胞色素P450酶系含量與活性測定方法，取10尾鯽魚，應(yīng)用差速離心法提取鯽魚肝微粒體，Lowry法測定肝微粒體蛋白濃度，紫外分光光度法測定肝微粒體細胞色素P450酶系含量與活性。結(jié)果顯示鯽魚肝微粒體蛋白含量為5.238±0.97mg／g肝重，細胞色素P450含量為0.319±0.032 nmol／mg蛋白，NADPH-細胞色素C還原酶活性為2

3、.145±0.181 nmol／min／mg蛋白，氨基比林N-脫基酶活性為1.775±0.084 nmol／min／mg蛋白，紅霉素N-脫甲基酶活性為0.906±0.073nmol／min／mg蛋白，苯胺羥化酶活性為0.063+0.007 nmol／min／mg蛋白。提示本文建立的鯽魚肝微粒體細胞色素P450酶系的檢測方法靈敏可靠，重復(fù)性較好。 2 幾種藥物對鯽魚肝微粒體細胞色素P450酶系的影響 在肝微粒體水平上，研究

4、了苯巴比妥、地塞米松、恩諾沙星及沙拉沙星等幾種藥物對鯽魚細胞色素P450酶系的影響。苯巴比妥按40mg／kg體重、地塞米松按2mg／kg體重給鯽魚腹腔注射，1次／d×4d；恩諾沙星和沙拉沙星均以100mg／kg體重劑量口灌給藥，1次／d×5d，各組于末次給藥后24h殺魚取肝作進一步試驗。結(jié)果表明：經(jīng)苯巴比妥處理的鯽魚微粒體蛋白濃度、細胞色素P450含量以及NADPH-Cyt C還原酶、氨基比林-N-脫甲基酶、紅霉素-N-脫甲基酶和苯胺羥

5、化酶等4種酶的活性和對照組比較均無顯著差異(P>0.05)；地塞米松處理組的CYP450含量和ERND活性稍有增加，但所有各項檢測指標與對照組相比差異亦無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；和對照組比較，恩諾沙星和沙拉沙星組CYP450含量顯著降低(P<0.05)，4種酶的活性極顯著下降(P<0.01)。提示苯巴比妥和地塞米松對鯽魚CYP450酶系無影響，而恩諾沙星和沙拉沙星則對鯽魚肝藥酶具有廣泛的抑制作用，水產(chǎn)臨床使用這兩種藥物時應(yīng)考慮到它們

6、對P450酶的抑制作用。 用以氯唑沙宗為底物探針的藥動學方法研究氟苯尼考和乙醇對鯽魚細胞色素P450 2El活性的影響，為臨床合理用藥提供參考。將鯽魚隨機分為3組，即對照組、氟苯尼考組和乙醇組。實驗組鯽魚分別每日經(jīng)口給予氟苯尼考100Mg/kg·bw和乙醇1g/Kg·bw，連續(xù)5天后，與對照組鯽魚同時一次性腹腔注射氯唑沙宗10mg/kg·bw，用高效液相色譜法分別測定氯唑沙宗在三組鯽魚體內(nèi)代謝過程中不同時間點的血藥濃度，并計算藥