骨髓間充質干細胞移植對腺嘌呤致腎間質纖維化大鼠模型的影響.pdf

1、目的：
　　 各種腎臟疾病進展到終末期腎衰竭的共同途徑為腎間質纖維化。研究如何延緩、阻止甚至逆轉腎間質纖維化為當前研究的熱點問題.骨髓間充質干細胞可分化為腎組織的多種細胞并參與腎損傷后的修復和再生.骨髓MSCs移植在幾種常用的腎間質纖維化動物模型中得到應用，并取得不同的治療效果。腺嘌呤致腎間質纖維化模型近年來廣泛應用于藥物研究領域，但CNKI及Pubmed檢索未見有關骨髓MSCs移植對于該模型大鼠作用的報道。
　　 本實

2、驗通過體外分離、培養(yǎng)、純化和擴增大鼠骨髓MSCs，用帶有綠色熒光蛋白基因的腺病毒（Ad-GFP）進行轉染，并建立腺嘌呤致大鼠腎間質纖維化模型，將轉染Ad-GFP的MSCs移植入大鼠體內，觀察骨髓MSCs移植后在腎臟中的分布并檢測大鼠腎功能、尿蛋白定量，a-SMA表達量的變化探討骨髓MSCs移植對腺嘌呤所致腎間質纖維化大鼠模型的影響。
　　 材料與方法：
　　 體外分離、培養(yǎng)Wistar大鼠MSCs，免疫組化方法進行CD9

3、0、CD34鑒定；以不同強度攜帶綠色熒光蛋白的重組腺病毒（Ad-GFP）轉染MSCs，用流式細胞儀測定轉染效率，篩選出最佳轉染強度（MOI），并以最佳轉染強度將HGF基因體外轉染MSCs。
　　 選擇3月齡Wistar大鼠25只，隨機分為正常對照組及模型組，模型組給予腺嘌呤100mg/Kg/d灌胃30天，各組隨機取5只留尿取腎。停藥3個月后，將剩余模型組分為移植組與非移植組，移植組給予Ad-GFP轉染的MSCs移植，對照組注射等

4、量的無血清培養(yǎng)基，于移植后30天留尿取腎，取雙側腎臟，制作石蠟切片，HE、PAS、Masson染色，免疫熒光雙標記，免疫組化a-SMA。
　　 結果：
　　 1.骨髓MSCs原代培養(yǎng)7-9天可以傳代，傳代后細胞增殖加快，4-5天可再次傳代；免疫組化結果顯示骨髓MSCs中CD90陽性、CD34陰性。
　　 2.轉染強度MOI=400時，轉染效率為54.1％
　　 3.成功以100mg/kg/d腺嘌呤灌胃制作

5、大鼠腎間質纖維化模型。
　　 4.免疫熒光結果顯示：移植組腎間質區(qū)可見大量綠色熒光細胞，隨機計數(shù)5個視野內熒光雙標記細胞占所有顯示綠色熒光細胞的比例約為31.4％。
　　 5.移植組肌酐尿素氮較非移植組顯著升高，24小時尿蛋白定量增多，腎臟病理評分多，a-SMA表達強于非移植組，而與正常對照組相比均有顯著差異。
　　 結論：
　　 在腺嘌呤致腎間質纖維化大鼠模型中，經鼠尾靜脈注射Ad-GFP轉染的MSCs