兒茶素單體對實驗性結腸炎大鼠腸粘膜的保護作用.pdf

1、研究背景: 炎癥性腸病(InflammatoryBowelDisease，IBD)是病因尚未確定的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，包括潰瘍性結腸炎(UlcerativeColitis，UC)和克羅恩病(Crohn'sDisease，CD)。IBD在我國發(fā)病率比較低，但近年來有大幅增加的趨勢。由于該疾病自然病程的復雜特殊及對患者生活質量的嚴重影響，IBD的治療現(xiàn)已成為消化系統(tǒng)疾病中的難點，日益受到關注。由于目前國內(nèi)外尚未找到特異性治療

2、藥物，尋找其他療效顯著且副作用小的藥物以替代目前的常規(guī)藥物已成為全世界研究的熱點。其中純天然提取無毒無害的植物藥在此方面有獨特的優(yōu)勢。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)是綠茶中茶多酚的主要成分，為全天然提取，無毒無害，具抗氧化、抗炎及抗腫瘤等多種生物學活性。2006年10月31日，EGCG被美國FDA批準為第一個植物處方新藥，主要用于人類乳頭瘤病毒(HPV)引起的生殖器疣，更是把它

3、在臨床上的應用提升到一個新的境界，引發(fā)人們對它在其它疾病的應用進行了多方面的探索。 目的和意義: 我們在建立三硝基苯磺酸(2，4，6—trinitrobenzenesulfollicacid，TNBS)這種經(jīng)典大鼠IBD模型的基礎上，國內(nèi)首次采用灌腸給藥方式來觀察EGCG對這種大鼠實驗性結腸炎的作用效果，進而從不同角度對其有關機制進行探討，以期為EGCG成為IBD有效治療藥物的開發(fā)應用提供實驗依據(jù)。 材料和方法:

4、 1.實驗動物的分組：將50只SD大鼠隨機分正常對照組、模型組、陽性藥物對照組、EGCG組及EGCG預處理組，每組10只。大鼠禁食不禁水24h后，將溶于500ml/L乙醇的TNBS按100mg/kg，體積0.25ml/只，用導管(直徑4mm)經(jīng)肛門插入結腸內(nèi)約8cm灌腸，建立IBD模型。陽性藥物對照組、EGCG組制模24h后，分別用5—ASA(100mg/kg)、EGCG(100mg/kg)灌腸2周，1次/d；EGCG預處理組在

5、制模前3d給予100mg/kgEGCG灌腸干預，1次/d，大鼠TNBS誘導制模后，給予100mg/kgEGCG灌腸2周，1次/d。正常對照組與模型組均給予等量生理鹽水灌腸治療。 2.肉眼觀察大鼠結腸大體結構的改變，并評價結腸粘膜損傷指數(shù)(CMDI)。取腸組織制作石蠟切片行HE染色及評分。 3.按試劑盒方法檢測腸組織中MPO、MDA和NO的含量；Hoechst33258熒光染色法檢測大鼠腸粘膜上皮細胞凋亡的情況。

6、4.分別用免疫組化、RT—PCR檢測腸粘膜iNOS的蛋白和mRNA表達。 5.ELISA檢測腸組織中PGE2含量，分別用免疫組化、RT—PCR檢測腸粘膜COX-2的蛋白和mRNA表達。 6.分別用ELISA、RT—PCR檢測大鼠血清、腸組織IL-1、IL-10的水平。 7.WesternBlotting檢測大鼠腸粘膜NF—κBp65蛋白水平的變化。 8.計量資料用均數(shù)±標準差表示。兩樣本均數(shù)的比較采用St

7、udent'st—test，多樣本均數(shù)的比較采用OneWayANOVA。P<0.05為有顯著性差異。采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。 結論: 1.EGCG灌腸能不同程度改善實驗性結腸炎大鼠腸粘膜大體結構及病理組織學征象，其中以EGCG預防灌腸的效果最好。 2.EGCG起保護作用的機制包括：1)抗氧化、抗凋亡作用；2)抑制iNOS的活性，從而減少毒性物質NO的生成；3)降低COX-2的表達，減少組織中花生四烯

8、酸代謝產(chǎn)物PGE2產(chǎn)生。4)局部下調腸組織中IL-1表達，而上調腸組織中IL-10的表達。 3.EGCG可通過降低NF—κBp65蛋白的表達，下調COX-2、iNOS的表達，使其產(chǎn)物PGs、NO生成減少，從而達到減輕炎癥的目的。因此NF—κB可作為EGCG治療大鼠實驗性結腸炎的一個有效的分子“靶點”。 4.我們的實驗初步證實，EGCG是一種有效的預防和治療IBD的植物藥，它在經(jīng)濟性和安全性上的優(yōu)勢，使之更具有廣闊的開發(fā)和