人參皂苷Rd誘導人腦膠質瘤U251細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：通過體外培養(yǎng)人腦膠質瘤U251細胞，研究人參皂苷Rd（ginsenoside Rd，GS-Rd）對U251細胞凋亡的影響及可能的作用機制，為其在腦膠質瘤方面的應用提供基礎研究資料。
　　方法:體外培養(yǎng)U251細胞，設置GS-Rd濃度為10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L、50μmol/L、60μmol/L、80μmol/L,MTT法檢測GS-Rd對U251細胞的增殖抑制率的影響，作用時間設為

2、24h、48h、72h，繪制細胞增殖抑制曲線確定作用時間，根據(jù)IC50確定GS-Rd的給藥濃度，實驗分為空白對照組、溶媒組、GS-Rd低濃度組（20μmol/L）、GS-Rd中濃度組（40μmol/L）、GS-Rd高濃度組（80μmol/L）,藥物作用時間為48h，檢測相應指標;①不同濃度GS-Rd作用U251細胞48h，通過流式細胞術Annexin-V FITC/PI雙染檢測細胞凋亡率；②通過熒光相差顯微鏡觀察各實驗組U251細胞生長

3、、形態(tài)學變化情況；③不同濃度GS-Rd作用U251細胞12h、24h、48h，通過Elisa法檢測U251細胞端粒酶活性的變化；④不同濃度GS-Rd作用U251細胞48h，通過實時熒光定量PCR（RT-PCR）檢測U251細胞caspase-3、Bcl-2、hTERT表達的影響。
　　結果：①GS-Rd在濃度為20~80μmol/L范圍內(nèi)對U251細胞均有一定的抑制作用，并且隨藥物濃度的增加其作用強度增強，有一定劑量依賴性，作用時

4、間設定為48h，根據(jù)IC50結果77.38μmol/L將GS-Rd組濃度設置為20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L；②GS-Rd在濃度為20~80μmol/L范圍內(nèi)可誘導U251細胞凋亡，溶媒組與空白對照組相比，其細胞凋亡率的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），GS-Rd濃度20μmol/L與空白對照組相比，其差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），GS-Rd濃度80μmol/L與空白對照組相比，其差異具有極顯著統(tǒng)計學意義（P

5、<0.01）；③顯微鏡下觀察，與空白組與溶媒組相比，GS-Rd低、中、高劑量組可使U251細胞數(shù)目減少，出現(xiàn)細胞體積變小，變形，變圓，脫落，胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，凋亡晚期可見凋亡小體等凋亡細胞的形態(tài)學變化，其作用強度有劑量依賴性；④溶媒組與空白對照組相比，處理U251細胞12h、24h、48h端粒酶活性變化無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），與空白對照組相比，GS-Rd濃度20μmol/L作用U251細胞24h、48h端粒酶活性降低，其差異

6、有統(tǒng)計學意義（P<0.01），而作用12h，其端粒酶活性變化無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；⑤與空白對照組相比，GS-Rd濃度40μmol/L，80μmol/L作用U251細胞12h、24h、48h端粒酶活性降低，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；⑥與空白組對照相比，各濃度GS-Rd作用U251細胞48h，Bcl-2 mRNA、hTERT mRNA表達顯著降低，其差異極具有統(tǒng)計學意義（P<0.01），caspase-3 mRNA表達顯著提高，