姜黃素抑制組蛋白乙酰化阻斷酒精誘導的心肌細胞凋亡.pdf

1、目的：
　　母孕期酒精暴露可能導致胎兒心臟發(fā)育異常，但其發(fā)生機制尚不十分清楚?？偹苤凭巧钪谐Ｒ姷闹禄镔|，能夠引起心肌細胞凋亡和心臟發(fā)育異常。我們課題組前期研究表明組蛋白乙酰化在酒精暴露引起心臟發(fā)育異常中起到關鍵作用。這篇文章進一步探討組蛋白乙?；欠裨诰凭鸬男募〖毎蛲鲋邪l(fā)揮了重要作用。
　　方法：
　?。?）C57孕鼠隨機分為酒精組和對照組，于E7.5天分別給予56%酒精（10μl/g）和等量生理鹽水灌

2、胃至E15.5天，收集E17.5天胎鼠心臟進行以下檢測：
　?、賅esternblot檢測組蛋白H3K9乙酰化水平；
　?、赒-PCR檢測凋亡基因caspase-3、caspase-8和bcl-2 mRNA表達水平，Westernblot檢測caspase-3、active-caspase-3、caspase-8、active-caspase-8和bcl-2蛋白表達水平；
　?、跜hIP-Q-PCR檢測凋亡基因casp

3、ase-3、caspase-8和bcl-2啟動子區(qū)域組蛋白H3K9乙?；?；
　　④TUNEL檢測心肌細胞凋亡水平。
　?。?）心肌祖細胞分為酒精組、姜黃素組、酒精+姜黃素組、對照組、DMSO組，分別給予120μl PBS、200mM酒精、25μM姜黃素、200mM酒精+25μM姜黃素、25μl DMSO，干預24小時后收集細胞進行以下檢測：
　?、賅estern blot檢測組蛋白H3K9乙酰化水平；
　?、?/p>

4、Western blot檢測caspase-3、active-caspase-3、caspase-8、active-caspase-8和bcl-2蛋白表達水平；
　?、哿魇綑z測細胞凋亡。
　　結果：
　?。?）Westernblot結果顯示酒精暴露后，組蛋白 H3K9乙?；矫黠@升高（P＜0.05）。
　　（2）Q-PCR結果顯示酒精暴露后，胎鼠心臟凋亡基因caspase-3、caspase-8 mRNA水平升

5、高，抗凋亡基因bcl-2 mRNA水平降低（P＜0.05）。Westernblot結果顯示酒精暴露引起 active-caspase-3和active-caspase-8表達升高，引起caspase-3、caspase-8和bcl-2表達降低（P＜0.05）。
　?。?）ChIP-Q-PCR結果顯示酒精暴露后，caspase-3和caspase-8啟動子區(qū)域組蛋白H3K9乙?；缴撸?bcl-2啟動子區(qū)域組蛋白H3K9乙?；?/p>

6、水平降低（P＜0.05）。
　　（4）TUNEL結果顯示酒精暴露引起胎鼠心肌細胞凋亡水平升高，而對照組無凋亡細胞出現(xiàn)（P＜0.05）。
　?。?）Westernblot結果顯示酒精干預能夠引起心肌祖細胞組蛋白H3K9乙?；缴撸≒＜0.05），而姜黃素干預能夠阻斷酒精引起的組蛋白H3K9高乙?；≒＜0.05）。
　?。?）Westernblot結果顯示酒精干預能夠引起心肌祖細胞凋亡基因active-caspase

7、-3和active-caspase-8表達升高，引起caspase-3、caspase-8和bcl-2表達降低（P＜0.05），而姜黃素干預能夠阻斷該變化。
　　（7）流式細胞術結果顯示酒精干預能夠引起心肌祖細胞凋亡水平升高（P＜0.05），而姜黃素干預能夠阻斷酒精引起的心肌祖細胞凋亡水平升高（P＜0.05）。
　　結論：
　?。?）酒精暴露可能通過上調組蛋白 H3K9乙酰化水平而引起心肌細胞凋亡。
　　（2）組