外源性轉化生長因子-β1對肝星狀細胞中Smad3和Smad7早期表達的影響.pdf

1、目的：探討外源性TGF-β1對大鼠肝星狀細胞系(HSC-T6)信號通路中相關蛋白的影響,為抑制TGF-β1誘導的肝纖維化提供實驗依據。
　　方法：(1)HSC-T6培養(yǎng)基中加/不加外源性TGF-β1(10ng/ml),誘導2h后應用RT-PCR法檢測TGF-β/Smad信號通路中各組蛋白mRNA的表達;(2)選用同樣的方法檢測加入外源性TGF-β1后不同時間點Smad7mRNA的表達;(3)將陰性對照質粒(ctrl)、Smad3小

2、干擾質粒(siRNA-Smad3)分別轉染HSC-T6,各組再根據加/不加外源性TGF-β1分為(+)組和(-)組,RT-PCR法檢測Smad3、Smad7mRNA的表達;(4)Western印跡法分析外源性TGF-β1對不同時間點Smad3、Smad7蛋白表達的影響。
　　結果：(1)外源性TGF-β1能誘導TGF-β/Smad信號通路中Smad7mRNA的高表達(2.990±0.101,t=-33.962,P=0.001),但

3、對TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3、Smad4、Smad6mRNA的表達均無明顯影響(均P>0.05);(2)外源性TGF-β1處理HSC-T6后,Smad7mRNA的表達迅速增高,于2h達峰值,為0h的2.99倍,隨后開始逐漸下降,Smad7的表達量與0h相比均無明顯變化(均P>0.05);(3)與陰性對照組相比,siRNA-Smad3組Smad3mRNA的表達明顯下降(0.532±0.169,t=4.810,P=0.041

4、),同時siRNA-Smad3(-)組Smad7mRNA的表達較ctrl(-)組明顯降低,siRNA-Smad3(+)組Smad7mRNA的表達較ctrl(+)組也明顯降低(F=9.787,P=0.02);(4)不同時間點Smad3蛋白表達水平均無明顯變化(均P>0.05);Smad7蛋白表達與PCR的結果一致,呈時間依賴。
　　結論：外源性TGF-β1可誘導HSC-T6中Smad7早期短時高表達;Smad3可能是外源性TGF-β