Hrd-1與Derlin-1在胃癌中表達及對葡萄糖轉運蛋白GLUT-1表達的影響.pdf

1、目的:探討葡萄糖轉運蛋白GLUT-1及E3泛素連接酶Hrd-1、逆轉運蛋白Derlin-1在胃癌中的表達及意義，及三者之間的相互關系，并進一步探究胃癌中Hrd-1及Derlin-1對于GLUT-1的調控機制。
　　方法:應用免疫組化及免疫印跡方法檢測人類胃癌組織和癌旁組織中GLUT-1、Hrd-1、Derlin-1的表達差異。在人類胃癌SGC-7901細胞中分別過表達Derlin-1與GLUT-1、RNAi技術沉默Derlin-1

2、，并應用免疫熒光及免疫印跡法檢測蛋白表達水平變化;MTT法檢測Derlin-1表達情況對于SGC-7901細胞增殖的影響;使用免疫共沉淀技術檢測Derlin-1與GLUT-1結合情況。
　　結果:
　　1.免疫組化及免疫印跡法發(fā)現胃癌組織中GLUT-1、Hrd-1、Derlin-1蛋白表達水平均高于癌旁組織;GLUT-1主要表達于細胞膜上及部分胞質內，與胃癌的大小及病理分型相關;Derlin-1及Hrd-1主要表達于細胞質中

3、，Derlin-1表達與胃癌的淋巴結轉移相關;GLUT-1在胃癌的表達水平與Hrd-1及Derlin-1的表達水平負相關。
　　2.使用RNAi技術敲降Derlin-1在人胃癌細胞SGC-7901中的表達，MTT結果顯示，siRNA介導的Derlin-1表達下調對SGC-7901細胞的增殖無明顯影響;同時過表達SGC-7901細胞中的Derlin-1對其增殖亦未見明顯影響。
　　3.在SGC-7901細胞中共轉染EGFP-m

4、yc-GLUT-1質粒和pcDNA3.1-Derlin-1及單獨轉染EGFP-myc-GLUT-1質粒，轉染48小時后提取細胞裂解上清液，進行免疫共沉淀實驗，用anti-myc抗體免疫沉淀Derlin-1，隨后使用免疫印跡法檢測免疫沉淀物發(fā)現共轉染組和單獨轉染組均有Derlin-1蛋白條帶顯示，證明GLUT-1和Derlin-1蛋白存在著相互結合作用。
　　4.在人類胃癌細胞SGC-7901內共轉染EGFP-myc-GLUT-1和

5、pcDNA3.1-Derlin-1以及EGFP-myc-GLUT-1和pSilencer-Derlin-1重組載體，同時使用了單獨轉染EGFP-myc-GLUT-1的以及EGFP-myc-GLUT-1分別與該兩種重組載體對應的空白載體共轉染的人類胃癌細胞SGC-7901作為對照，轉染48小時轉染EGFP-myc-GLUT-1和pcDNA3.1-Derlin-1組與共轉染EGFP-myc-GLUT-1和對應空載載體組比較，Derlin-1

6、表達明顯增高，而GLUT-1表達隨之降低;共轉染EGFP-myc-GLUT-1和pSilencer-Derlin-1重組載體組與共轉染EGFP-myc-GLUT-1和對應空載載體組比較，Derlin-1表達明顯降低，而GLUT-1表達隨之增高;共轉染EGFP-myc-GLUT-1和兩種空載質粒的兩組與單獨轉染EGFP-myc-GLUT-1組未見GLUT-1與Derlin-1表達有明顯差異。
　　結論:GLUT-1、Derlin-1