ShRNA-hIAP2增強CNE-1鼻咽癌細胞對放射敏感性的實驗研究.pdf

1、鼻咽癌作為中國地域常見的一種惡性腫瘤，其發(fā)病起于鼻咽粘膜被覆上皮，自然生存時間平均為18.7個月，起病隱蔽，早期不易被發(fā)現(xiàn)。發(fā)病者多分布于我國兩廣地區(qū)、沿海省份福建、中南地區(qū)如湖南等，從性別上來看，女性發(fā)病率小于男性。從發(fā)病年齡上來看，以中年人為主。從種族易感性上來看，白種人發(fā)病率小于黃種人，從病因上來看，其發(fā)病與人類皰疹病毒感染和某些遺傳因素等有關系。目前，治療手段以放射治療為主。從已有的國內外報道可知，鼻咽癌放射治療后5年生存率為6

2、0％左右。隨著放射治療設備更新，放射治療技術改進，鼻咽癌放射治療后的5年生存率不斷提高。上海某腫瘤醫(yī)院報告，1955年以前應用深度X線治療，5年生存率為8％，1983年5年生存率為54％。鼻咽癌放療后的局部復發(fā)和遠處轉移是病人死亡的主要原因，復發(fā)與轉移是鼻咽癌多種生物效應的結果，因此除了要改進放療技術，提高放療效果外，還要對鼻咽癌的生物學特性，鼻咽癌病人機體方面的因素以及腫瘤與病人機體相互作用等因素進行研究。根據(jù)病人機體鼻咽癌的生物學特

3、性，在治療上從放療、化療、免疫治療、基因治療、中醫(yī)中藥和其他治療方法上綜合考慮，選擇和制定適宜的治療方案，以進一步提高療效。本研究以鼻咽癌細胞系CNE1為研究對象，構建shRNA-hIAP2，采用RNA干擾為手段，采用脂質體介導的轉染方法，研究hIAP2對增強CNE1細胞株對于放射敏感性的影響，初步探討其作用機制，為臨床基因輔助治療打下一定基礎。
　　目的:構建凋亡抑制蛋白(hIAP-2)的shRNA，靶向抑制hIAP-2基因聯(lián)合

4、放療，探討其對CNE1鼻咽癌細胞株放射敏感性的影響。
　　方法:首先采用MTT法確定最佳放射劑量;再構建四條hIAP-2-shRNA沉默片段并用脂質體法轉染CNE1細胞，最后采用實時熒光定量PCR(Q-PCR)和免疫印跡法(WB，Western blot)篩選出最佳沉默shRNA序列;用最佳沉默shRNA序列轉染CNE1細胞，分別設置轉染放射線照射組與未轉染放射線照射組，采用實時定量PCR和WB檢測hIAP-2的基因及蛋白表達，采

5、用ICC檢測hIAP-2在CNE1細胞中的表達，流式細胞術測細胞凋亡，transwell測細胞侵襲能力。
　　結果:MTT法確定4Gy為最佳放射劑量;Q-PCR和WB檢測結果顯示四條hIAP-2-shRNA均能有效抑制hIAP-2 mRNA及蛋白表達(P＜0.05)，以hIAP-2-shRNA2沉默效果最顯著(P＜0.05);Q-PCR、WB及ICC檢測結果顯示轉染hIAP-2-shRNA2后照射組與未轉染hIAP-2-shRNA

6、2照射組的CNE1細胞中hIAP-2基因與蛋白表達有顯著差異(P＜0.05);流式細胞術檢測結果顯示轉染hIAP-2-shRNA2后照射組比未轉染hIAP-2-shRNA2照射組凋亡率有顯著差異(P＜0.05);transwell檢測結果顯示轉染hIAP-2-shRNA2后照射組與未轉染hIAP-2-shRNA2照射組侵襲能力有顯著差異(P＜0.05)。
　　結論:轉染hIAP-2基因沉默后放射可增加鼻咽癌細胞凋亡率，降低其侵襲能