辛伐他汀對大鼠視網膜缺血再灌注中BcL-2和Bax表達及細胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　1.采用夾閉大鼠右側頸總動脈的方法，建立視網膜缺血再灌注損傷模型。觀察缺血再灌注后視網膜各層形態(tài)結構的變化、Bcl-2(The B-cellleukemia/lymphoma-2)和Bax(Bcl-2-Associated X)的變化趨勢以及視網膜細胞的凋亡情況。
　　2.初步探討辛伐他汀在大鼠眼部缺血再灌注損傷中的作用，為將來治療眼部缺血再灌注損傷提供新的理論依據。
　　方法:
　　1.采用夾閉頸總

2、動脈的方法造模。選取健康成年SD雄性大鼠165只，數字表法隨機分為對照(CON)組、模型(MOD)組和藥物（SIM）組，每組55只，每組分4h、8h、16h、24h、48h，總共5個時間點，各時間點11只。模型組、藥物組夾閉右側頸總動脈，對照組暴露右頸總動脈不夾閉。
　　2.分別在處理4h、8h、16h、24h、48h后對對照(CON)組、模型(MOD)組和藥物(SIM)組大鼠脫頸處死，制作眼球標本行HE染色觀察視網膜各層形態(tài)結構

3、的變化，免疫組織化學染色檢測Bcl-2和Bax的蛋白表達水平，提取視網膜RNA用Real Time RT-PCR方法檢測Bcl-2和Bax mRNA的表達水平，采用Tunel法檢測視網膜各層的細胞凋亡情況。
　　結果:
　　1.HE染色結果顯示:對照組各層結構無異常。模型組8h時視網膜出現(xiàn)水腫;16h時水腫加重，出現(xiàn)RGCs數目減少，INL層變薄;24h時水腫基本消失，RGCs數目繼續(xù)減少，INL進一步變薄;48h時視網膜變

4、薄。藥物組8h和16h時較模型組視網膜組織水腫減輕;16h、24h及48h和模型組相比，RGCs減少較低，視網膜INL厚度改變不明顯。
　　2.免疫組織化學結果顯示:模型組Bcl-2于4h開始下降，在24h達到最低值，與對照組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);藥物組各時間點均高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各組相應時間點相比較，差異有統(tǒng)計學意義(F4,8,16,24,48=8.079，9.005，9.904，35.5

5、63，8.810,P＜0.05)。模型組Bax從4h開始上升，24h達到高峰，與對照組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）;藥物組各時間點均低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各組相應時間點相比較，差異有統(tǒng)計學意義(F4，8,16,24,48=16.601，13.525，10.303，25.849，13.805，P＜0.05）。
　　3.Real Time RT-PCR方法結果顯示:Bcl-2 mRNA在模型組各組均低于對照

6、組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而藥物組各組均高于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各組相應時間點相比較，差異有統(tǒng)計學意義(F4,8,16,24,48=112.934,109.750,3534.800,112.428,128.140,P＜0.05)。Bax mRNA在模型組各組均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而藥物組各組均低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各組相應時間點相比較，差異有統(tǒng)計學意義(

7、F4，8,16,24,48=74.115，54.504，81.271，243.743，97.163,P＜0.05)。
　　4.Tunel法結果顯示:模型組細胞凋亡指數從4h開始上升，24h達到高峰，與對照組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);藥物組低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。各組相應時間點相比較，差異有統(tǒng)計學意義(F4,8,16,24,48=87.096,232.245,575.564,389.205,771.65

8、8,P＜0.05)。
　　結論:
　　1.本研究采用夾閉頸總動脈的方法成功建立大鼠視網膜缺血再灌注模型:模型組Bcl-2的表達減少，Bax的表達增加，視網膜厚度出現(xiàn)短暫水腫，RGCs數目減少，INL變薄，凋亡細胞數目增加。
　　2.藥物組與模型組相比較，Bcl-2的表達增加，Bax的表達降低，視網膜厚度改變不明顯，RGCs數目減少較低，凋亡細胞數目降低。因此，凋亡基因Bcl-2和Bax的比例變化在視網膜缺血再灌注中對于