Notch信號通路在肝纖維化組織中的改變.pdf

1、肝纖維化是肝臟受損后,機體修復(fù)過程中肝臟纖維組織過度沉積的一種可逆性病理現(xiàn)象。Notch信號通路是一條保守的信號傳導途徑,與細胞的分化、發(fā)育等密切相關(guān)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)Notch信號通路參與肝臟發(fā)育,該通路與肝臟疾病尤其是肝癌間關(guān)系的研究越來越多。但是,在肝纖維化組織中是否存在Notch信號通路相關(guān)蛋白的表達,Notch信號通路是否也在肝星狀細胞轉(zhuǎn)分化的過程發(fā)揮作用尚未見報道。因此,本實驗的目的是探索Notch信號通路在肝纖維化中的表達

2、及變化,并探索其在肝纖維化中的可能機制。
　　第一部分Notch信號配體Jagged-1在人肝纖維化組織中的表達
　　目的：觀察Notch信號通路配體Jagged-1在人肝纖維化組織中的變化。
　　方法：(1)肝纖維化組肝組織11例,均來源于華中科技大學附屬協(xié)和醫(yī)院2010年至2011年期間HBV感染CHB患者:其中女性5名,男性6名;平均年齡43歲(范圍在31-55歲之間)。對照組為無肝纖維化患者肝組織6例。(2)采

3、用免疫組織化學方法檢測Notch配體分子Jagged-1在人肝纖維化組織的表達。
　　結(jié)果：(1)免疫組化結(jié)果顯示與正常對照組相比,Notch信號配體Jagged-1在肝纖維化組中表達明顯升高。(2)Jagged-1在匯管區(qū)纖維瘢痕的表達隨著α-SMA表達增加而增加。
　　結(jié)論：Notch信號分子配體Jagged-1在肝纖維化組織與正常肝組織中差異表達,可能參與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。
　　第二部分Notch信號通路在實驗

4、性肝纖維化大鼠模型中的變化
　　目的：應(yīng)用CCL4構(gòu)建大鼠實驗性肝纖維化模型,觀察Notch信號通路在模型大鼠肝組織中的變化。
　　方法：(1)42只清潔級SD雄性大鼠,隨機分為正常對照組(n=6)、4周模型組(n=6)、6周模型組(n=10)、8周模型組(n=10)、12周模型組(n=10),皮下注射50％植物油CCl4混懸液0.3ml/100g體重,每周兩次。4周模型組、6周模型組和8周模型組分別于連續(xù)注射4、6、8周解

5、剖,正常對照組于第8周解剖,12周模型組注射至第8周末,于第12周解剖。(2)觀察肝組織,并取同一部位肝組織4%多聚甲醛固定過夜,常規(guī)石蠟包埋切片做形態(tài)學分析。另留肝臟組織,PBS洗滌,置-80℃冰箱保存,分為兩部分,分別提取蛋白和RNA。
　　結(jié)果：(1)肝組織病理檢查結(jié)果顯示:與正常對照組相比,模型組隨著造模時間延長纖維化程度加重,膠原沉積增加。8周模型組纖維化程度達到S3～S4級,12周模型組達S2～S3級。免疫組化顯示:α

6、-SMA隨造模時間延長而表達增加,停止注射CCL4后α-SMA表達下降。確認實驗性肝纖維化大鼠造模成功。(2)RT-PCR顯示:與正常對照組相比,模型組Notch-3(Notch受體)、Jagged-1(Notch配體)、Hes-1(下游靶基因)、α-SMA表達上調(diào),而Notch受體Notch-1、Notch-2、Notch-4表達無明顯差異(P<0.05)。(3)組織間接免疫熒光(IHF)顯示:與正常對照組相比,模型組Notch-3、

7、Jagged-1、Hes-1、α-SMA表達明顯升高,α-SMA與Hes-1在同一組織細胞中表達部位一致。
　　結(jié)論：(1)50%CCL4混合液(0.3ml/100g體重皮下注射,每周2次,共8周)可以成功誘導實驗性肝纖維化大鼠模型,停止注射CCL4后1月可出現(xiàn)自發(fā)性肝纖維化逆轉(zhuǎn)。(2)在大鼠肝纖維化模型中存在Notch信號通路的活化,Jagged-1/Notch-3/Hes-1信號通路參與肝纖維化形成。(3)Notch信號可能與