單肺通氣相關性肺損傷的特點、信號轉導通路及防治策略.pdf

1、第一部分實驗一：
　　 目的：建立兔單肺通氣實驗模型。
　　 方法：健康日本大耳白兔 10 只，麻醉后仰臥位固定。右側股靜脈建立靜脈通道，右側股動脈置管監(jiān)測動脈血壓并采集動脈血標本；行氣管切開并插入自制雙腔氣管導管實施機械通氣，呼吸機通氣參數為：FiO2 1.0，RR 40/min，VT 10 ml/kg。以聽診法仔細調整自制雙腔氣管導管位置，并采用氣泡試驗法檢測左側氣管膨大處的密閉效果。將動物調整為左側臥位后，鉗閉左側

2、管腔建立右肺單肺通氣模型，并以纖支鏡直接觀察左側肺葉呼吸運動是否停止并萎陷。單肺通氣2h 后，松開左側管腔恢復雙肺通氣。在單肺通氣前、單肺通氣后30min和恢復雙肺通氣30min 三個時間點測血壓、心率、氣道壓和動脈血氣分析。
　　 結果：實驗中單肺通氣效果滿意，操作方便，血流動力學穩(wěn)定，各時點動脈血氣變化規(guī)律與臨床一致。
　　 結論：采用自制雙腔氣管導管可以建立日本大耳白兔單肺通氣模型。此模型簡單方便，成功率高，適用于

3、研究單肺通氣相關的肺損傷和低氧血癥的病理生理機制及其防治策略。
　　 第一部分實驗二：
　　 目的：采用三種方法建立兔單肺通氣模型并比較其效果。
　　 方法：日本大耳白兔 30 只，隨機分為3組(即A、B、C組)各10個，分別采用自制雙腔氣管導管法、左支氣管結扎法和插管過深法。呼吸機通氣參數為：FiO2 1.0，RR40/min，VT 10 ml/kg。單肺通氣2h 后恢復雙肺通氣。記錄各組單肺通氣實施的一次成功

4、率、總成功率、從氣管切開開始到單肺通氣實施所需要的時間、動物失血量。
　　 結果：各組進入實驗的動物數分別為10、6、8 只。與B、C組比較，A組一次成功率和總成功率高，所需時間明顯較少(P<0.01)，且出血量明顯少于B組(P<0.01)。
　　 結論：采用自制雙腔氣管導管能迅速有效的建立單肺通氣模型，優(yōu)于左支氣管結扎法和插管過深法，是用于研究與單肺通氣相關病理生理機制的理想模型。
　　 第二部分
　　

5、 目的：建立兔單肺通氣模型后，觀察兩側肺損傷的特點以及不同時間的影響，為后續(xù)的研究摸索條件。
　　 方法：健康日本大耳白兔24 只，隨機分為4組：對照組(C組，n ＝6)雙肺通氣2h ；
　　 右側單肺通氣組(O1組、O2組及O3組，n ＝6)單肺通氣時間分別為1h、2h、3h，隨后恢復雙肺通氣1h。在實驗結束前開胸，分別由兩側肺靜脈同時抽取肺靜脈血、由股動脈抽取動脈血做血氣分析并測定氧合指數；采用頸動脈快速放血處死動物

6、，將各組左右肺分開處理。檢測各組肺組織病理改變，并計算肺損傷評分；檢測各肺組織濕干重比值、MPO、MDA、SOD。
　　 結果：⑴ C組左右側肺、O1組右側肺組織結構形態(tài)完整，肺泡內無明顯滲出液，肺間質無明顯水腫和炎癥；O1組左側肺、O2組右側肺和O3組右側肺肺泡內可見滲出液，肺間質增厚并可見炎性細胞浸潤；O2組左側肺、O3組左側肺肺泡內可見滲出液，部分肺泡腔萎陷不張或充血，肺間質增厚并可見大量炎性細胞浸潤。肺損傷評分：C組左右

7、側相比較差異無統(tǒng)計學意義(P ﹥0.05)，另三組組內左右側比較則左側明顯增高(P<0.01)；各組間右側比較表現為逐步升高，其中O3組右側與O1組右側相比較明顯增高(P<0.05)；各組間左側相比較亦表現為逐步升高，其中O2組左側、O3組左側與O1組左側相比較明顯增高(P<0.01)，O1組左側與C組左側相比較明顯增高(P<0.01)。⑵各組氧合指數比較，C組左右側相比較差異無統(tǒng)計學意義(P ﹥0.05)，另三組組內左右側比較則左側明

8、顯下降(P<0.01)；各組間右側比較表現為逐步降低，其中O3組右側與O1組右側相比較明顯降低(P<0.01)；各組間左側相比較亦表現為逐步降低，其中O2組左側、O3組左側與O1組左側相比較明顯下降(P<0.01)，O1組左側與C組左側相比較明顯降低(P<0.01)。動脈血氣所測得氧合指數表現為逐步降低，O2組、O3組與O1組相比較明顯下降(P<0.01)，O1組與C組相比較明顯降低(P<0.01)。
　　 ⑶各組濕/干重比、M

9、PO 活性和MDA的變化表現為C組組內左右側相比較差異無統(tǒng)計學意義(P ﹥0.05)，O1組、O2組和O3組組內左右側比較則左側明顯增高(P<0.01)；各組間右側比較表現為逐步升高，其中O3組右側與O1組右側相比較明顯增高(P<0.01),O1組右側與C組右側相比較明顯增高(P<0.01)；各組間左側相比較亦表現為逐步升高，其中O2組左側、O3組左側與O1組左側相比較明顯增高(P<0.01)，O1組左側與C組左側相比較明顯增高(P<0

10、.01)。⑷各組SOD 值的變化表現為C組和O1組組內左右側相比較差異無統(tǒng)計學意義(P ﹥0.05)，O2組和O3組組內左右側比較則左側明顯降低(P<0.01)；各組間右側比較表現為逐步降低，其中O3組右側與O1組右側相比較明顯降低(P<0.01)，O1組右側與C組右側相比較明顯降低(P<0.01)；各組間左側相比較表現為逐步降低，其中O2組左側、O3組左側與O1組左側相比較明顯降低(P<0.01)，O1組左側與C組左側相比較明顯降低(

11、P<0.01)。
　　 結論：長時間單肺通氣可以導致急性肺損傷，這種損傷是不均一性的，損傷的程度與單肺通氣時間相關，且非通氣側肺要比通氣側肺損傷嚴重。
　　 第三部分
　　 目的：通過建立兔單肺通氣模型，觀察NF-κB在單肺通氣肺損傷中的作用及對炎性因子TNF-和ICAM-1的影響，以探討單肺通氣肺損傷的機制。
　　 方法：健康日本大耳白兔18 只,隨機分為3組：TLV組、OLV組和PDTC組，各6 只。

12、TLV組實施雙肺機械通氣3h。OLV組采用自制雙腔氣管導管實施右側單肺通氣2h 后恢復雙肺通氣1h。PDTC組在實施單肺通氣前由靜脈輸入PDTC50mg/kg，其后操作與OLV組相同。在實驗結束前由股動脈抽取動脈血做血氣分析測定氧合指數。各組左右肺分開處理。光學顯微鏡下觀測各組肺組織病理改變，并計算肺損傷評分；檢測各肺組織濕/干重比值、MPO、MDA、SOD ；Wes t er n Bl ot檢測肺細胞核內NF-κ B p65蛋白和胞漿

13、內I κ B-α的表達水平；EMSA檢測肺組織細胞NF-κ B的活性；ELISA測TNF-α和ICAM-1的含量，并用RT-PCR檢測肺組織中TNF-α和細胞粘附分子(ICAM-1)基因mRNA的表達水平。
　　 第四部分
　　 目的：研究在兔OLV 模型中采用肺保護性通氣，同時降低吸入氧濃度，觀察其對肺部炎癥反應和NF-κ B 表達的影響，探討OLV 時合理的通氣模式。
　　 方法：健康日本大耳白兔18 只,隨

14、機分為3組：A組、B組和C組，各6 只。采用自制雙腔氣管導管建立單肺通氣模型，右單肺通氣2h 后恢復雙肺通氣1h。呼吸機通氣參數為：A組，RR 40/min，VT 10 ml/kg，FiO2100[％]；B組，RR 40/min，VT 7 ml/kg，PEEP 5cmH2O，FiO2 100[％]；C組，RR 40/min，VT 7 ml/kg，PEEP 5cmH2O，FiO2 60％。分別在OLV前、OLV 后30min和恢復雙肺通氣

15、(TLV)30min 三個時間點做動脈血氣分析并計算氧合指數。各組左右肺分開處理。光學顯微鏡下觀測各組肺組織病理改變，并計算肺損傷評分；檢測各肺組織濕/干重比值、MPO、MDA、SOD ；Wes t er n Bl ot檢測肺細胞核內NF-κ B p65蛋白和胞漿內I κ B-α的表達水平；EMSA檢測肺組織細胞NF-κ B的活性；ELISA 測TNF-α和ICAM-1的含量，RT-PCR檢測肺組織中TNF-α和ICAM-1mRNA的表