血清miR-19b、miR-29c在鼻咽癌診斷中的作用及其分子通路初探.pdf

1、背景:鼻咽癌是一種與EB病毒感染有關、多基因參與、遺傳與環(huán)境因素協(xié)同作用的惡性腫瘤,在我國兩廣、福建發(fā)病率較高,其發(fā)病具有性別差異,男性發(fā)病是女性的兩倍以上。miRNA是一種廣泛存在于動、植物以及病毒中的非編碼小分子RNA,它通過與靶mRNA結合抑制蛋白的翻譯或降解mRNA。MiRNA在染色體上的位置與腫瘤密切相關,它通常位于與腫瘤發(fā)生有關的染色體區(qū)域。另外,miRNA還受表觀遺傳學調控,通過誘導沉默表達的腫瘤抑制基因(TSGs)再表達

2、,從而發(fā)揮抑制腫瘤的作用,因此miRNA的表達升高或降低可以起到致癌作用或抑癌作用,它的差異表達與腫瘤密切相關。近年來,人們在血清、血漿中發(fā)現存在大量miRNA,而且這些miRNA具有一定的特性:血清miRNA具有抗RNA酶、抗酸、抗堿、抗凍融處理的穩(wěn)定性;在正常人中血清miRNA的表達基本是一致的,但是腫瘤患者血清miRNA的表達卻有明顯差異,而且這些miRNA的差異表達程度與腫瘤的良惡性及預后呈一定的相關性,因此血清miRNA具有成

3、為腫瘤分子標記物的條件。曾有學者對鼻咽癌患者的組織miRNA表達譜進行了檢測,發(fā)現,在鼻咽癌患者中有些miRNA表達明顯改變,例如,miR-29c的表達較正常人下調5倍,而本課題組前期研究也發(fā)現,在潛伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)陽性表達的鼻咽癌細胞株中miR-19b表達升高10倍以上。目前,關于miRNA靶基因的預測有多種,但其具體的分子作用機制仍有待探討。
　　目的:(1)分別檢測血

4、清miR-19b、miR-29c在鼻咽癌病人、鼻咽癌病人放化療后以及非癌人群中的表達差異,探討其作為鼻咽癌臨床診斷分子標記物的意義,以及探討其作為鼻咽癌放化療后檢測復發(fā)標記物的意義(2)分別檢測鼻咽癌病人和鼻咽粘膜慢性炎病人的組織蠟塊中miR-19b靶基因SOCS-1、miR-29c靶基因COL1A1的差異表達,從而對miR-19b、miR-29c的分子通路作一個初步探討,為以后鼻咽癌的靶基因治療提供一項依據。
　　方法:(1)收

5、集鼻咽癌病人、鼻咽癌放化療后病人、非癌人群血清各30例,然后通過RNA提取、逆轉錄、熒光定量PCR技術,分析血清miR-19b、miR-29c在鼻咽癌病人放化療前后、鼻咽癌病人與非癌人群中的表達差異。(2)收集鼻咽癌病人及鼻咽部粘膜慢性炎病人的組織學蠟塊各30例,其中,收集蠟塊的鼻咽癌病人為曾經采血的鼻咽癌病人,通過免疫組化技術檢測其SOCS1及COL1A1的表達差異情況,并與其血清miR-19b、miR-29c的表達進行相關性分析,從

6、而對miR-19b及miR-29c在鼻咽癌致癌作用中的分子通路做一個初步探討。
　　結果:(1)通過熒光定量PCR技術對血清miR-19b、miR-29c的表達進行檢測發(fā)現,與非癌人群相比,血清miR-19b、miR-29c在鼻咽癌病人與鼻咽癌放化療后的病人中有明顯增高的趨勢,經過SPSS17.0樣本均數的單因素方差分析發(fā)現,miR-19b和miR-29c在鼻咽癌與非癌人群中存在顯著性差異(P<0.05),而鼻咽癌放化療前后無顯著

7、性差異。(2)經過對鼻咽癌病人與鼻咽部粘膜慢性炎病人的組織切片免疫組化檢測發(fā)現,SOCS-1在鼻咽癌中均呈陰性表達,而在30例粘膜慢性炎的病人中有25例呈陽性或強陽性表達,與miR-19b血清學檢測具有一致性,說明miR-19b的差異表達可能與SOCS-1相關,經過SPSS17.0相關性分析發(fā)現,miR-19b與SOCS-1的表達存在負相關,相關系數為-0.573。COL1A1在鼻咽癌病人與鼻咽部粘膜慢性炎病人中均為陰性表達,經過相關性