單純皰疹病毒Ⅱ型潛伏相關轉錄子基因真核表達載體的構建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本實驗通過構建表達2.2kbLAT的真核表達載體pVAX-LAT,使其在SH-SY5Y神經細胞中瞬時表達,為后續(xù)在HSV-2低滴度情況下,模擬人體內神經節(jié)中LAT的大量表達,抗神經細胞凋亡的實驗,提供了實驗基礎。 從皰疹病毒Ⅱ型基因組里,PCR擴增出長為3200 bp的LAT基因。由于HSV-2LAT基因GC含量高(達78%),且二級結構復雜,因此不易擴增,也不易直接連接。因此研究選用LAT基因與pVAX載體共有的BamH Ⅰ酶

2、切位點,將LAT基因分為HindⅢ-BamH Ⅰ(1200bp)和BamH Ⅰ-Pst Ⅰ(2000bp)兩段,分段克隆,并設計兩對含相應酶切位點的引物,以一次PCR擴增的LAT基因為模板,PCR擴增獲得LAT全長基因的兩分段產物HindⅢ-BamH I和BamH Ⅰ-Pst Ⅰ,分別連接至pVAX載體中,構建兩個表達載體pVAX-HindⅢ-BamH Ⅰ和pVAX-BamH Ⅰ-Pst Ⅰ。重組載體采用通用引物進行序列測定分析,與Ge

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