重組人堿性成纖維細胞生長因子對脂肪干細胞分化的影響.pdf

1、研究目的:
　　 本實驗目的在于探討不同濃度重組人堿性成纖維細胞生長因子(Recombinant Human FGF-basic，rh-bFGF)對體外培養(yǎng)的人脂肪源干細胞(human adipose-derived stem cells，hASCs)誘導分化為脂肪細胞的影響，通過觀察hASCs誘導分化為脂肪細胞中新形成脂滴出現(xiàn)的時間、新形成脂肪細胞的增殖速率和成熟脂滴表面定位蛋白CIDEC的表達量，從而尋找體外促進hASCs向

2、脂肪細胞分化所需加入rh-bFGF的最佳濃度。
　　 材料與方法:
　　 1.鄭大五附院健康抽脂患者獲得脂肪混懸液，采用膠原酶消化的方法，分離、提取hASCs，進行體外培養(yǎng)、擴增，在顯微鏡下進行細胞形態(tài)的觀察，臺盼藍染色后對hASCs進行計數(shù)，應用流式細胞儀進行細胞表型的鑒定。將傳至第三代的細胞進行成脂誘導并用油紅O染色對其進行鑒定。
　　 2.hASCs傳至第三代時，分四組進行成脂誘導，將加入0ng/ml rh

3、-bFGF的設為對照組，將加入10ng/mlrh-bFGF,20ng/ml rh-bFGF，40ng/ml rh-bFGF設為實驗組。各組分別用油紅O染色連續(xù)監(jiān)測脂滴出現(xiàn)時間，并比較其差異是否有統(tǒng)計學意義。
　　 3.各組分別于加入不同濃度的rh-bFGF之后的12h、24h、48h用MTT比色法檢測hASCs誘導分化為脂肪細胞的細胞增殖率。
　　 4.各組在成脂誘導的14d時，運用western印跡法檢測成熟脂滴定位蛋

4、白CIDEC的蛋白表達量，并比較其差異。
　　 結果:
　　 1.體外提取、培養(yǎng)的hASCs光鏡下觀察成梭形，流式細胞儀鑒定其表型均符合hASCs標準，成脂誘導第7天后鏡下觀察到大小不一的脂滴，油紅O染色呈陽性。
　　 2.各組在油紅O染色時定性記錄脂滴出現(xiàn)時間，實驗組和對照組之間平均出現(xiàn)脂滴時間比較p＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。實驗組各組間比較差異有統(tǒng)計學意義。其中40ng/ml rh-bFGF出現(xiàn)脂滴平均時

5、間為(11.5±1.9)h。
　　 3.各組分別加入不同濃度rh-bFGF后的12h、24h、48h，MTT比色法檢測新形成脂肪細胞的增殖率。其中40ng/ml rh-bFGF的吸光度平均值為0.522±0.100。
　　 4.Western印跡法檢測實驗組和對照組新形成脂滴表面定位蛋白CIDEC的表達量并進行比較，差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　 結論:
　　 實驗組能縮短體外hASCs分化為