磷酸化蛋白質組學新方法的研究與應用.pdf

1、蛋白質磷酸化修飾是最常見，最重要的的一種蛋白質翻譯后修飾方式，蛋白質磷酸化和去磷酸化幾乎調節(jié)著生命活動的所有關鍵過程。同時磷酸化的失調會導致很多嚴重的人類疾病，如癌癥，糖尿病，心臟病，老年癡呆癥等。因此，蛋白質磷酸化研究一直以來都是蛋白質組學研究的熱點，同時用蛋白質組學的策略研究生物體的磷酸化修飾也是功能蛋白質組學的重要研究內容。由于磷酸化蛋白質在生物體內的含量很低，對它的檢測和位點分析一直是蛋白質組學的難點，而磷酸化蛋白質的大規(guī)?；?/p>

2、析和位點鑒定更是磷酸化蛋白質組研究面臨的巨大挑戰(zhàn)。神經干細胞在生命活動中執(zhí)行了多種重要的生理功能，具有重要的理論意義和廣闊的應用前景，因此其磷酸化研究有助于人們深入的理解和認識神經干細胞的復雜功能以及蛋白質磷酸化在神經干細胞增殖，生長等生物過程中的意義。
　　 本論文的工作包括3個方面：1）基于一種全新的化學標記試劑和生物質譜的磷酸化蛋白質分析方法的建立;2）磷酸化蛋白質數據分析平臺的建立;3）大規(guī)模磷酸化蛋白質組學分析技術在小

3、鼠神經干細胞磷酸化蛋白質組學研究中的應用。
　　 第一部分以標準磷酸化蛋白質為樣本建立了蛋白質磷酸化修飾分析技術體系：自主設計并合成了一種新的磷酸化特異性標記試劑MPAE(4-甲基哌嗪乙酰乙二胺);通過對肽段的酯化，標記有效的將標記試劑引入到磷酸化基團;最后用串聯質譜分析區(qū)分磷酸化肽段和非磷酸化肽段，并結合數據庫檢索鑒定確定磷酸化位點。
　　 第二部分建立了磷酸化蛋白質組學數據分析及其處理平臺，通過對搜庫參數進行了優(yōu)化，

4、確立了嚴格的搜尋條件，保證了結果的可靠性和準確性，為大規(guī)模，高通量的磷酸化蛋白質組學分析奠定了基礎，此外，我們編寫了適合我們實驗方法的磷酸化定位程序，為接下來的磷酸化定位分析鋪平了道路。
　　 第三部分利用所建立的磷酸化蛋白質分析方法大規(guī)模的分析了小鼠神經干細胞(C17.2cell)提取的全蛋白質中的磷酸化蛋白質，共鑒定出337個磷酸化肽，405個磷酸化位點，分別歸屬于259個磷酸化蛋白質，其中有18個磷酸化位點是文獻中沒有報道