白藜蘆醇激活H9c2心肌細(xì)胞ERK1-2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抗氧化應(yīng)激損傷的機(jī)制研究.pdf

1、目的
　　 培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞建立氧化應(yīng)激模型,同時(shí)選擇并選用ERK1／2途徑作為研究對(duì)象,利用ERK1／2通路特異性阻斷劑UO126進(jìn)一步探討可能的作用機(jī)制,觀測(cè)白藜蘆醇對(duì)心肌細(xì)胞抗氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)及機(jī)制。
　　 方法
　　 通過(guò)傳代方法培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為以下5組:正常對(duì)照組、過(guò)氧化氫(H2O2)組、白藜蘆醇+H2O2組、白藜蘆醇+UO126+H2O2組、UO126+H2O2組。實(shí)驗(yàn)終止后,在倒

2、置相差顯微鏡下觀察H9c2心肌細(xì)胞形態(tài)及變化,測(cè)定乳酸脫氫酶(LDH)的釋放及超氧化物歧化酶(SOD)的活性,采用硫代巴比妥酸顯色法測(cè)定丙二醛(MDA)含量,采用流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)心肌細(xì)胞的凋亡。采用Western-blot測(cè)定ERK1／2蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果
　　 1.1.H2O2組較對(duì)照組LDH活性顯著增加(998.084±23.07vs477.11±17.78,P<0.05),MDA活性也顯著增加(32.054±

3、1.76vs7.42±1.51,P<0.05),SOD活性顯著降低(15.43±4.52vs35.03±2.17,P<0.05),比較兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.白藜蘆醇+H2O2組較H2O2組,LDH活性顯著降低(617.34±11.23vs998.08±23.07,P<0.05),MDA活性也顯著降低(16.334±1.68vs32.05±1.76,P<0.05),SOD活性顯著增加(29.03±3.18vs15.4

4、3±4.52,P<0.05),比較兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.凋亡率結(jié)果顯示,空白對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)良好,凋亡率極低為6.73±2.38。H2O2組出現(xiàn)大量凋亡細(xì)胞,其凋亡率為56.2±4.73,與空白對(duì)照組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；白藜蘆醇+H2O2組其凋亡率顯著降低為38.17±3.08,與H2O2組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4.UO126+H2O2組比較對(duì)照組LDH活性顯著降低(

5、658.19±21.38vs998.08±23.07,P<0.05),MDA活性也顯著降低(20.01±3.16vs32.05±1.76,P<0.05),SOD活性顯著增加(22.33±1.78vs15.43±4.52,P<0.05),比較兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而白藜蘆醇+UO126+H2O2組與UO126+H2O2組的LDH、MDA、SOD活性比較,均無(wú)顯著性差異。
　　 5.H2O2可顯著上調(diào)ERK1／2的表達(dá),白藜蘆醇+

6、H2O2組可顯著下調(diào)H2O2所致的ERK1／2表達(dá),上述差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義:而白藜蘆醇+UO126+H2O2組與白藜蘆醇+H2O2組比較,ERK1／2表達(dá)無(wú)差異。
　　 結(jié)論
　　 1.H2O2可以誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞發(fā)生氧化作用,并發(fā)生細(xì)胞凋亡；
　　 2.白藜蘆醇可以拮抗H2O2所致的H9c2心肌細(xì)胞氧化作用,抑制H2O2所致的H9c2心肌細(xì)胞凋亡,對(duì)H9c2心肌細(xì)胞有保護(hù)作用；
　　 3.白藜蘆醇