利用無(wú)選擇標(biāo)記表達(dá)載體獲得轉(zhuǎn)TPS1基因的百脈根.pdf

1、近年來(lái)，非生物脅迫特別是低溫、干旱和鹽害對(duì)農(nóng)作物產(chǎn)量的影響日益加重，如何提高農(nóng)作物抵抗不良外界環(huán)境的能力在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上具有重要意義。利用植物分子生物技術(shù)提高植物的抗寒、抗旱和耐鹽能力是近幾年研究的熱點(diǎn)。在幾個(gè)關(guān)鍵的逆境因子中，干旱尤其值得重視，因?yàn)殡S著全球水資源的不斷惡化，干旱問(wèn)題將會(huì)越來(lái)越突出，而隨著抗旱新基因的不斷發(fā)現(xiàn)，有關(guān)轉(zhuǎn)化抗旱相關(guān)基因并得到抗性植物的報(bào)道越來(lái)越多。 在轉(zhuǎn)基因植物中，標(biāo)記基因常被用于篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞或組織，給轉(zhuǎn)

2、基因工作帶來(lái)很大方便，但在獲得轉(zhuǎn)基因植物之后，篩選標(biāo)記基因的存在可能對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生不良影響，這也是目前公眾擔(dān)心轉(zhuǎn)基因植物安全性的最重要原因。把選擇標(biāo)記基因去掉，將提高轉(zhuǎn)基因植物的環(huán)境安全性和食用安全性，更易被廣大消費(fèi)者所接受，也有利于對(duì)同一個(gè)植物品種進(jìn)行多次轉(zhuǎn)基因操作。近年來(lái)，科學(xué)工作者已經(jīng)在建立無(wú)選擇標(biāo)記基因轉(zhuǎn)化系統(tǒng)方面作了大量嘗試，獲得了無(wú)標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)基因植物(MFTPs：Marker-Free Transgenic Plan

3、ts)。 本研究中，我們以啤酒酵母基因組DNA為模板，利用PCR的方法從中分離得到與抗旱相關(guān)的海藻糖-6-磷酸合酶(TPS1)基因，以一種可化學(xué)誘導(dǎo)的Cre/loxP位點(diǎn)特異性DNA重組體系pX6-GFP載體為基礎(chǔ)，對(duì)其進(jìn)行改造，將其中的綠色熒光蛋白(GFP)基因替換成為T(mén)PS1基因，構(gòu)建新的pX6-TPS1載體。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將新構(gòu)建的載體pX6-TPS1轉(zhuǎn)入豆科模式植物百脈根中，經(jīng)抗生素篩選后獲得轉(zhuǎn)基因植株。這些植株在5μ