雪蓮果試管塊根誘導及其發(fā)育相關基因片段的克隆.pdf

1、雪蓮果(Smallanthus sonchifolius)為菊科向日葵屬雙子葉草本植物，原產于南美安第斯山區(qū)。雪蓮果植株富含多糖類、黃酮類、酚酸類和揮發(fā)油類等多種活性成分，具食用、藥用和環(huán)境保護綜合開發(fā)利用的價值。目前，市場上雪蓮果供不應求，而雪蓮果的推廣種植卻受到種源限制。因而我們開展了雪蓮果試管塊根的離體誘導試驗，同時借助SSH技術構建了雪蓮果離體塊根發(fā)育相關基因的消減文庫。主要研究結果如下：
　?。?）以葉片為外植體，采用正

2、交設計研究蔗糖、NAA和BA對雪蓮果試管塊根誘導的影響。結果表明：NAA對葉片誘導試管塊根影響顯著，其次為蔗糖和NAA；篩選得到葉片誘導雪蓮果試管塊根的最優(yōu)培養(yǎng)基為：MS+BA3 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+蔗糖70 g·L-1。
　?。?）以莖段為外植體，采用正交設計研究蔗糖、NAA和BA對雪蓮果試管塊根誘導的影響。結果表明：蔗糖對莖段誘導雪蓮果試管塊根影響顯著，其次為BA和NAA；篩選得到莖段誘導試管塊根的最優(yōu)培

3、養(yǎng)基為：MS+BA3 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1+蔗糖70 g·L-1。
　　（3）以雪蓮果試管塊根為研究模型，取未膨大期的不定根為對照組，膨大期（10 d，15 d，20 d）的塊根為試驗組，通過抑制差減雜交技術構建了與雪蓮果塊根發(fā)育相關的差減文庫。經初步篩選和測序獲得97個有效EST片段，利用GO分類標準對ESTs從細胞組分，生物過程和分子功能進行了2級水平分類。選取11個差異表達基因用Real-time PCR