人肺腺癌細胞A549中DEK的作用機制研究.pdf

1、目的:DEK是廣泛存在于細胞核內高度保守的可磷酸化癌蛋白，在人類許多惡性腫瘤中均出現(xiàn)過表達，表現(xiàn)出與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。DEK可通過改變染色質結構，修復DNA，參與mRNA剪接與信號通路，或作為轉錄因子等途徑調控細胞的增殖、分化、凋亡、遷移、衰老等，與腫瘤細胞的形成有著重要的關系。目前關于DEK促進腫瘤發(fā)展的研究越來越多，然而關于DEK與肺癌的關系以及DEK在肺癌中的作用機制尚未有完善的研究成果。前期研究結果顯示，DEK蛋白在人肺癌

2、腫瘤組織中的表達量明顯高于正常組織，提示DEK可能在肺癌的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用，因此本研究在前期工作的基礎上，進一步在細胞層面上研究DEK沉默對肺癌細胞轉錄組的影響，并深入探討DEK在肺癌中的作用機制，為肺癌的治療提供新的途徑與實驗依據(jù)。
　　方法:本實驗通過實時熒光定量RT-PCR與Western Blotting檢測6種肺癌細胞系中DEK表達水平差異，從中篩選出內源性高水平表達DEK的細胞，并通過RNAi慢病毒載體構建DEK

3、沉默的A549細胞，通過RNA-Seq檢測由DEK沉默誘導的差異表達基因，再通過GO分析與Pathway分析評估差異表達基因與肺癌的關系，最后在細胞層面上驗證分析的準確性，通過MTT法檢測DEK沉默對A549細胞增殖能力的影響，PI染色法檢測DEK沉默對A549細胞周期的影響，AnnexinⅤ-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒檢測DEK沉默對A549細胞凋亡的影響，此外，通過實時熒光定量RT-PCR與Western Blotting檢測

4、IGFBP3/IGF-1R/AKT通路相關基因的表達水平。
　　結果:通過GO分析與Pathway分析評估DEK沉默的A549細胞中差異表達基因與肺癌的關系，結果顯示DEK與細胞生長和死亡密切相關。進一步，使用DEKsiRNA轉染A549細胞，檢測DEK沉默對A549細胞功能的影響，結果顯示DEK沉默可抑制A549細胞的增殖，引起A549細胞周期在G1期發(fā)生阻滯，而且能夠顯著促進細胞的凋亡。最后檢測IGFBP3/IGF-1R/AK