FXR1P相互作用蛋白的篩選與鑒定.pdf

1、脆性X綜合征（Fragile X syndrome, FraX）是最常見的遺傳性智力低下疾病之一。臨床表現(xiàn)多樣，主要表現(xiàn)為中到重度的智力低下，常伴有巨睪、特殊面容、多動癥、癲癇發(fā)作，大量患者腦電圖存在特征性彌漫性瞬間慢波發(fā)放等臨床病理表現(xiàn)。超過99％的FraX是由位于Xq27.3的脆性X智力低下基因1（fragile X mental retardation 1，F(xiàn)MR1）5′端非編碼區(qū)（CGG）n三核苷酸重復序列的異常擴增及CpG島的

2、異常甲基化引起FMR1編碼產物脆性X智力低下蛋白（fragile X mental retardation protein，F(xiàn)MRP）的表達下降或缺失所導致。分別定位于3q28及17p13.1的脆性X相關基因1/2（fragile X related gene 1/2，F(xiàn)XR1/2）被發(fā)現(xiàn)與FMR1具有高度的序列及結構相似性，三者統(tǒng)稱為脆性X基因家族（FXR gene family）。其編碼的蛋白不僅可以與自身結合形成同源二聚體，也可與

3、家族中其他蛋白結合以異源二聚體形式存在。FXR1P系列相互作用蛋白的篩選以及驗證將在一定程度上有助于了解FXR1P的調節(jié)機制及其基本功能，進而明確FXR1P與脆性X 綜合征發(fā)病機制的關系。 本研究利用酵母雙雜交技術研究FXR1P相互作用蛋白，首先構建酵母雙雜交系統(tǒng)誘餌質粒pGBKT7-FXR1，并將其轉化酵母菌AH109，與轉化了Matchmaker人胎腦pGADT7-cDNA文庫質粒的酵母菌 Y187進行配合（Mating），

4、通過一系列報告基因的表達檢測篩選陽性克隆，將經酶切鑒定后陽性克隆質粒AD/Library轉化酵母菌Y187，再與誘餌質粒pGBKT7-FXR1酵母菌進行一對一小交配驗證蛋白質的相互作用，真陽性克隆的AD/Library質粒測序及生物信息學分析，共得到了七種可能與FXR1P相互作用的蛋白：Btf，SAFB，CMAS，F(xiàn)TH1，CSH1，GOLGA4，HSD17B1；對其中的兩種與凋亡相關的蛋白（Btf和SAFB）進行了免疫共沉淀實驗，構建