酵母腺苷蛋氨酸合成酶基因的克隆及表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、S-腺苷蛋氨酸(SAM)是一種廣泛存在于各種組織和細胞中的生物小分子，具有轉甲基、轉硫和轉氨丙基等重要生理作用，已成為治療肝損傷、膽汁郁積和抑郁癥等疾病的重要藥物。 提取酵母染色體DNA并以其為模板，通過PCR的方法獲得目的基因sam2；PCR產物經純化后與T載體相連，構建克隆載體pT-sam2；pT-sam2經EcoRI酶切、NcoI部分酶切后插入pET20b(+)載體信號肽pelB的下游，構建了胞外表達重組質粒，命名為pET

2、O-sam2；再以構建成功的pETO-sam2為模板，設計一對尾-尾相對且5'端帶有相同酶切位點的引物，應用全質粒PCR的方法將pETO-sam2中的pelB信號肽序列去除，全質粒PCR產物經NdeI單酶切、T4連接酶連接，構建胞內表達重組質粒，命名為pETI-sam2。 結果表明胞外表達對宿主菌E.cole BL21(DE3)呈致死現象；胞內表達獲得成功，重組菌經1mM IPTG誘導6h并在其培養(yǎng)基中添加L-蛋氨酸至終濃度為0

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