光譜法研究三種頭孢類藥物與胰蛋白酶、牛轉(zhuǎn)鐵蛋白之間的相互作用.pdf

1、近年來(lái)，人類疾病的發(fā)生率逐年增加，各種藥物在生活中也起到了不容忽視的作用，為了更好的了解藥物的藥理、藥效和靶向運(yùn)輸，藥物與蛋白相互作用的研究課題已成為人們關(guān)注的重點(diǎn)。本文以胰蛋白酶和牛轉(zhuǎn)鐵蛋白為載體蛋白，用多種方法研究了硫酸頭孢匹羅、頭孢哌酮鈉、頭孢尼西鈉與蛋白的相互作用。
　　本研究分為五個(gè)部分：第一章闡述了幾種研究蛋白與小分子藥物相互作用的常用方法，并對(duì)胰蛋白酶和轉(zhuǎn)鐵蛋白進(jìn)行了簡(jiǎn)單的概述。對(duì)立題思路、研究?jī)?nèi)容以及藥物與蛋白相互

2、作用的展望進(jìn)行了簡(jiǎn)單的介紹。第二章用多種光譜法和分子對(duì)接法研究了胰蛋白酶和硫酸頭孢匹羅之間的相互作用。結(jié)果表明，硫酸頭孢匹羅使胰蛋白酶發(fā)生熒光猝滅，猝滅機(jī)理為靜態(tài)猝滅，結(jié)合位點(diǎn)數(shù)接近于1。猝滅曲線表明色氨酸殘基和酪氨酸殘基都參加了反應(yīng)。同步熒光光譜法進(jìn)一步表明，二者主要的結(jié)合位點(diǎn)更接近于色氨酸殘基。對(duì)熱力學(xué)參數(shù)的計(jì)算表明，二者之間主要作用力為靜電引力，分子對(duì)接表明二者之間的作用力為靜電引力，其中還有氫鍵作用。胰蛋白酶與硫酸頭孢匹羅之間的

3、距離小于7nm，表明從胰蛋白酶到硫酸頭孢匹羅的能量轉(zhuǎn)移為非輻射能量轉(zhuǎn)移。熒光光譜法對(duì)Hill系數(shù)的研究表明，硫酸頭孢匹羅與胰蛋白酶之間存在負(fù)協(xié)同作用。第三章利用熒光光譜法，同步熒光光譜法和紫外吸收光譜法研究了硫酸頭孢匹羅和牛轉(zhuǎn)鐵蛋白之間的相互作用。測(cè)定了二者之間的猝滅常數(shù)、結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)等。通過(guò)對(duì)熱力學(xué)參數(shù)的計(jì)算，確定了硫酸頭孢匹羅和牛轉(zhuǎn)鐵蛋白之間的主要作用力類型以靜電引力為主。通過(guò)對(duì)Hill系數(shù)的計(jì)算，得出了硫酸頭孢匹羅和牛轉(zhuǎn)鐵蛋

4、白之間的協(xié)同作用為負(fù)協(xié)同作用。第四章通過(guò)熒光猝滅法和同步熒光光譜法對(duì)頭孢哌酮鈉與牛轉(zhuǎn)鐵蛋白的相互作用機(jī)理進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，兩種方法用相同的公式計(jì)算得到的二者的猝滅機(jī)理、結(jié)合位點(diǎn)，相互作用力以及協(xié)同作用基本一致。并且通過(guò)對(duì)Δλ=60nm和λex=295 nm的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，得出同步熒光光譜法較之于傳統(tǒng)熒光光譜法有更高的靈敏度和準(zhǔn)確度。因此，同步熒光光譜法極大地豐富了小分子配體與蛋白之間相互作用機(jī)理的研究方法。第五章實(shí)驗(yàn)在pH=7.4緩