內質網應激蛋白和黏蛋白2在小鼠結腸炎中的表達及意義.pdf

1、背景：炎癥性腸病(IBD)是一種慢性非特異性腸道炎性疾病，包括潰瘍性結腸炎(UC)和克羅恩病(CD)兩種。近年來隨著生活條件的改善和環(huán)境不斷變化，該病在我國的患病人數(shù)呈明顯增加趨勢。炎癥性腸病的病因和發(fā)病機制尚不明確，目前多認為該病的發(fā)生是由遺傳、環(huán)境、微生物和免疫等多種因素相互作用所致。
　　內質網(ER)是真核細胞內負責蛋白質合成、折疊和分泌的重要細胞器，許多因素可以引起內質網穩(wěn)態(tài)紊亂，如營養(yǎng)缺乏、氧化應激等，導致未折疊或錯誤

2、折疊蛋白質在內質網腔堆積，引發(fā)內質網應激(ERS)。當出現(xiàn)內質網應激時，機體將啟動一系列適應性反應使細胞適應應激繼續(xù)存活，這種反應稱為未折疊蛋白反應(UPR)。未折疊蛋白反應通過三種感受器蛋白發(fā)出一系列調節(jié)信號，通過限制蛋白質翻譯減輕內質網負荷，幫助蛋白質正確折疊，加速錯誤折疊蛋白質降解，恢復內質網穩(wěn)態(tài)。當內質網應激持續(xù)時間過長或反應程度過深將會引起細胞凋亡，導致組織細胞受損。腸道上皮細胞不斷更新，屬于高分泌細胞，對內質網應激尤其敏感。

3、
　　近年來研究發(fā)現(xiàn)內質網應激與多種疾病發(fā)生發(fā)展有關，由內質網應激誘導的未折疊蛋白反應多條通路與炎癥反應通路相偶聯(lián)。有人提出內質網應激參與炎癥性腸病的發(fā)生與發(fā)展，但內質網應激對炎癥性腸病的具體作用機制尚不明確。
　　腸粘膜屏障損傷是潰瘍性結腸炎發(fā)病的一個關鍵因素，大量黏蛋白構成的粘液層是腸粘膜重要的化學屏障，杯狀細胞產生的黏蛋白(MUC)2是結腸粘液層主要的大分子結構，有研究表明 MUC2表達異常與腸道疾病密切相關。

4、　　本研究利用葡聚糖硫酸鈉(DSS)制造小鼠結腸炎模型，檢測炎癥狀態(tài)下結腸組織的內質網應激蛋白和 MUC2的表達情況，試圖為進一步認識炎癥性腸病的發(fā)病機制提供更多科學依據(jù)。
　　目的：觀察內質網應激蛋白 GRP78、PERK、ATF6、IRE1βmRNA和蛋白， IRE1α、CHOP、XBP1u和 XBP1s mRNA以及 MUC2 mRNA和蛋白在不同濃度 DSS誘導的結腸炎組織中的表達情況，探討這些分子表達變化在炎癥過程中的意

5、義。
　　方法：將8周齡雄性 C57BL/6小鼠隨機分為三組：正常對照組：正常自由飲水；1.5％DSS組和2.5%DSS組：分別自由飲用含1.5%(1.5g/100ml)和2.5%DSS的水溶液6天建立急性腸炎模型。每組10只。通過疾病活動指數(shù)(DAI)評分、測量結腸長度、蘇木素伊紅(HE)染色病理評分、檢測炎性因子 TNFα和 IL-6 mRNA的表達水平來評估結腸炎癥損傷程度。采用免疫組織化學(IHC)染色法檢測結腸組織中 G

6、RP78、IRE1β、ATF6、PERK和 MUC2的蛋白表達水平；實時定量PCR(RT-PCR)法檢測 GRP78、IRE1α、IRE1β、PERK、ATF6、XBP1u、XBP1s、CHOP和 MUC2的 mRNA表達水平。
　　結果：
　　1.正常對照組無結腸炎表現(xiàn)，1.5%DSS組和2.5%DSS組分別呈輕度和重度結腸炎。炎性細胞因子 TNFα和 IL-6 mRNA在1.5%DSS組表達增加，在2.5%DSS組表達進

7、一步增加。
　　2.免疫組化結果：GRP78、IRE1β、PERK、ATF6和 MUC2蛋白在正常對照組均表達；IRE1β、PERK、ATF6和 MUC2蛋白在1.5%DSS組表達減少；GRP78、IRE1β、PERK、ATF6和 MUC2蛋白在2.5%DSS組表達均明顯減少；IRE1β、PERK、ATF6和 MUC2在2.5%DSS組與1.5%DSS組表達差別不明顯。
　　3. RT-PCR結果：GRP78、IRE1α、I

8、RE1β、PERK、ATF6、XBP1u、XBP1s、CHOP和 MUC2 mRNA在正常對照組均表達；GRP78、CHOP mRNA在1.5%DSS組無變化，2.5%DSS組明顯減少；XBP1u mRNA三組之間無差異；IRE1α、IRE1β、PERK、ATF6和 MUC2 mRNA在1.5%DSS組和2.5%DSS組表達均減少，2.5%DSS組與1.5%DSS組之間無差別。
　　結論：
　　1.內質網應激蛋白 GRP78