轉錄因子FEZF2在視網膜神經節(jié)細胞發(fā)育過程中的作用.pdf

1、目的:FEZF2是一種具有鋅指結構的轉錄因子，選擇性的表達在大腦皮層第V皮層的下行性錐體投射神經元及前體細胞中。FEZF2參與大腦皮層投射神經元的產生和分化，對大腦皮層中投射神經元的發(fā)育具有決定性作用。視網膜與大腦皮層共同起源于神經外胚層，并且都具有層次結構。視網膜神經節(jié)細胞(RGCs)是將視覺信息從外界傳入大腦皮層的唯一通路。視網膜神經節(jié)細胞與大腦皮層第V皮層的投射神經元相似，都具有長距離，向外生長的特性。因而我們推測RGCs的調控可

2、能與大腦皮質神經元具有類似性。本課題主要研究FEZF2在視網膜神經節(jié)細胞中的表達及其作用。
　　方法:首先用免疫熒光的方法檢測FEZF2在視網膜及神經節(jié)細胞中的表達情況通過胚胎電轉染的方法，在視網膜中電轉入Fezf2的干擾質粒和空白對照質粒，觀察Fezf2受到抑制后神經節(jié)細胞的變化。并將Fezf2 flox/flox純和小鼠與Six3-cre小鼠交配獲得子一代小鼠，將子一代小鼠互相交配，通過基因型鑒定選出Fezf2 flox/fl

3、ox純和并且Six3-cre陽性的敲除小鼠（實驗組）與B6（對照組）的子二代小鼠。取小鼠一只眼睛的視網膜提RNA、進行Q-PCR鑒定Fezf2和Brn3b的表達，另一只眼睛則固定、脫水、冰凍切片或視網膜鋪片做免疫熒光，檢測敲除小鼠視網膜中神經節(jié)細胞的變化。
　　結果:通過免疫熒光結果可以發(fā)現FEZF2表達在視網膜神經節(jié)細胞中，并且在E16.5時表達最高。Fezf2下調后BRN3A表達沒有明顯變化，而BRN3B的表達明顯下降。免疫熒