膽道閉鎖肝組織中Th17細胞、γδT細胞及其相關因子表達的研究.pdf

1、目的：
　　病毒感染觸發(fā)自身免疫應答所致膽管進行性炎癥損傷是膽道閉鎖（biliary atresia,BA）的重要原因，但機制尚未完全闡明。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，BA患兒肝匯管區(qū)浸潤分泌IL-17A的T淋巴細胞，并證明其參與BA膽管炎癥損傷。近期文獻報道，γδT細胞激活后也可以分泌IL-17A，啟動并延續(xù)自身免疫疾病。因此我們推測：膽管微環(huán)境中γδT細胞也可能參與了BA膽管炎癥損傷。本項目擬開展如下研究驗證該假說。
　　方法：<

2、br>　　應用恒河猴輪狀病毒（RRV）制備Balb/c小鼠BA模型，隨機分為兩組：正常對照組和BA組，BA組小鼠出生后12h內(nèi)腹腔注射RRV建立膽道閉鎖模型。于出生后第4d、第7d、第11d處死并摘取肝臟。ELISA動態(tài)檢測小鼠肝組織中炎性細胞因子（IL-17A、IL-23、IL-6）的表達；免疫熒光染色觀察Th17細胞的分布特點；流式細胞術檢測 Th17細胞所占比例。干預實驗：BA小鼠模型在注射病毒24h后連續(xù)6天注射IL-17A中和

3、抗體和digoxin，觀察各組小鼠在不同時期組織病理學變化、膽道閉鎖發(fā)生率和生存期。免疫組織化學染色檢測BA患兒肝臟中γδT細胞表達部位及強度；流式細胞術檢測γδT細胞占肝臟T細胞的比例。
　　結(jié)果：
　　1) BA組IL-6在第4天表達量逐漸上升，在第7天達到峰值，與對照組相比表達量升高30倍(P<0.001)；IL-17A、IL-23第4天含量逐漸上升，第11天達到峰值，與對照組相比，IL-17為5.5倍，IL-23為4

4、.5倍(P＜0.01，P＜0.01)。免疫組織熒光顯示第7天BA組小鼠肝臟匯管區(qū)存在大量Th17細胞（P<0.05）；流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，Th17細胞從第4天開始升高，第7天達到頂點，隨后逐漸下降（P值＜0.05）。
　　2) BA小鼠模型在注射病毒24h后連續(xù)6天腹腔注射IL-17中和抗體（每次20μg）和digoxin（每次40μg），對照組注射生理鹽水。兩組膽道閉鎖發(fā)生率降低，肝臟組織匯管區(qū)炎癥表現(xiàn)減輕，伴隨有小鼠的生存

5、期延長。進一步分析發(fā)現(xiàn)注射 IL-17中和抗體組比 digoxin組膽道閉鎖發(fā)生率更低（ digoxin：anti-IL-17 Ab=75.0％：66.7%, p<0.01和<0.001，與RRV組對比），匯管區(qū)炎癥更輕（P<0.01），生存期更長（21天生存率：digoxin：anti-IL-17Ab=59.6%：78.2%, p<0.01和p<0.001，與RRV組對比）。
　　3)免疫組織化學染色顯示BA患兒肝臟匯管區(qū)有γδ