LncRNAs在膿毒癥急性腎損傷的作用.pdf

1、目的：⑴對(duì)在膿毒癥急性腎損傷患者外周血中差異性表達(dá)lncRNAs進(jìn)行生物信息學(xué)分析，以探討外周血lncRNAs在膿毒癥急性腎損傷發(fā)病中的作用。⑵探討KIM-1、NGAL及IL-6對(duì)早期鑒別診斷不同病原菌血流感染的膿毒癥急性腎損傷的價(jià)值。⑶檢測(cè)miR-4321和miR-4270表達(dá)水平在膿毒性AKI不同時(shí)間點(diǎn)變化。
　　方法：①選取3例膿毒癥急性腎損傷患者和3例健康志愿者為研究對(duì)象，采用lncRNA芯片篩查差異表達(dá)的lncRNAs，

2、對(duì)目標(biāo)lncRNAs進(jìn)行生物信息學(xué)分析。②清潔級(jí)SD雄性大鼠，尾靜脈注射大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株懸液，金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株懸液（濃度為1.5×108CFU/mL,注射量為0.1mL/100g），制備不同病原菌血流感染的膿毒癥急性腎損傷模型。大鼠隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組（Control組，15只），大腸埃希菌組（E.coli組，15只)，金黃色葡萄球菌組(SA組，15只)。實(shí)驗(yàn)組均按照6h、12h、24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為5個(gè)亞組

3、。收集血液和腎臟組織，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測(cè)血清肌酐（SCr）、血清尿素氮（BUN）、血KIM-1、NGAL、IL-6；免疫組化法檢測(cè)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)3組動(dòng)物腎臟病理組織形態(tài)學(xué)變化。③在大腸埃希菌組RT-PCR法檢測(cè)腎組織miR-4321和miR-4270表達(dá)量。
　　結(jié)果：⑴芯片篩查結(jié)果提示lncRNAs在膿毒癥急性腎損傷患者中出現(xiàn)差異性表達(dá)，最終確定30,586個(gè)差異表達(dá)的lncRNAs和26,109個(gè)差異表達(dá)的

4、mRNA（≥2倍的變化）。其中，與對(duì)照組比較，5361個(gè)上調(diào)和5928個(gè)下調(diào)差異性表達(dá)的lncRNAs。通過基因本體論（GO）和KEGG通路分析。GO分析表明差異表達(dá)的lncRNAs與細(xì)胞分化、免疫系統(tǒng)的發(fā)展、Toll樣受體4信號(hào)傳導(dǎo)途徑、炎性反應(yīng)、Wnt信號(hào)受體信號(hào)途徑等相關(guān)聯(lián)。KEGG信號(hào)通路表明，上調(diào)的lncRNAs對(duì)應(yīng)33條通路而下調(diào)的lncRNAs對(duì)應(yīng)17條通路。途徑分析顯示，MAPK信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)途徑，TGF-β的

5、信號(hào)傳導(dǎo)途徑，PI3K-Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑，Wnt信號(hào)通路，鈣離子信號(hào)通路途徑等炎癥反應(yīng)顯著富集。⑵ELISA結(jié)果檢測(cè)顯示，大腸埃希菌組、金黃色葡萄球菌組血KIM-1、NGAL、IL-6水平6h已達(dá)高峰，6h、12h、24h、48h都明顯高于正常對(duì)照組(p<0.01)。大腸埃希菌組血清KIM-1、NGAL、IL-6水平6h、12h、24h、48h均較金黃色葡萄球菌組明顯增高(p<0.05)。而血清BUN、Scr值12h明顯上升，48h達(dá)

6、高峰，比血KIM-1、NGAL升高時(shí)間延后。腎組織病理切片結(jié)果提示金黃色葡萄球菌組12h、24h、48h大鼠腎間質(zhì)充血程度、腎小管擴(kuò)張程度均較大腸埃希菌組有所減輕。⑶大腸埃希菌組miR-4321和miR-4270表達(dá)水平在注射6h后下降，24 h達(dá)到高峰，在48 h表達(dá)水平相比24 h表達(dá)水平降低。隨著疾病時(shí)間的延長(zhǎng)，miR-4321和miR-4270的水平顯著高于在6h、12 h、24h、48h表達(dá)水平（P<0.05）。
　　結(jié)